下调GPX1通过MAPK/NF-κB通路抑制急性髓系白血病细胞增殖和迁移

摘要

目的：探究谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)对急性髓系白血病（AML）细胞株增殖、迁移及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法：体外培养不同细胞系（HS-5、HL-60、KG-1、kasumi-1和THP-1），将KG-1细胞分为A组和B组，A组分为沉默GPX1阴性对照（si-NC）组、沉默GPX1-1(si-GPX1-1)组、沉默GPX1-2(si-GPX1-2)组和沉默GPX1-3(si-GPX1-3)组；B组分为空白对照（Control）组、沉默GPX1阴性对照（si-NC）组、沉默GPX1-1(si-GPX1-1)组、沉默GPX1-1和MAPK/NF-κB信号通路激动剂（si-GPX1-1+PMA）组。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和Western blotting检测不同细胞系和A组KG-1细胞中GPX1相对表达水平；CCK-8和EdU法检测B组KG-1细胞增殖情况；划痕实验和Transwell实验检测B组KG-1细胞迁移情况；Western blotting检测B组KG-1细胞中增殖、迁移及MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白（PCNA、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38、p-IκB、IκB、p-p65和p65）水平。结果：与人骨髓基质细胞HS-5相比，GPX1 mRNA和蛋白水平在AML细胞（HL-60、KG-1、kasumi-1和THP-1）中上调（P<0.05），且KG-1细胞中表达水平最高。与si-NC组相比，A组其余3组KG-1细胞中GPX1 mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.05），且si-GPX1-1组沉默效率高于其他两组。与si-NC组相比，si-GPX1-1组KG-1细胞增殖和迁移能力均降低（P<0.05）；细胞中PCNA、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（P<0.05）;p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38、p-IκB/IκB和p-p65/p65比值下调（P<0.05）。与si-GPX1-1组相比，si-GPX1-1+PMA组KG-1细胞增殖和迁移能力均增高（P<0.05）；细胞中PCNA、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平增高（P<0.05）;p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38/p38、p-IκB/IκB和pp65/p65比值上调（P<0.05）。结论：下调GPX1可能通过抑制MAPK/NF-κB信号通路抑制AML细胞增殖和迁移。

关键词

急性髓系白血病 / 谷胱甘肽过氧化物酶1 / 丝裂素活化蛋白激酶 / 核因子-κB / 细胞增殖 / 细胞迁移