羊水上清液的优化处理与核型分散的影响因素

摘要

目的：通过将培养7～9 d的羊水上清液继续接种于原位培养盒，达到简化原始上清液培养瓶法培养的收获步骤，同时探索控制原位玻片法核型分散的最优温度、湿度条件。方法：选取50例进行产前诊断的孕妇羊水标本为研究对象，羊水采用双线原位培养。7～9 d有多个梭形细胞克隆贴壁生长后更换新鲜的培养基，一盒上清液转入细胞培养瓶继续培养，另一盒上清液直接接种于新的原位培养盒，换液后1～3 d根据分裂期细胞形成情况考虑羊水原液的收获，羊水上清液的换液时间和收获时机同羊水原液。培养瓶法收获的羊水上清悬液经滴片、烤片、G显带制备染色体，选取原位法收获的羊水原液和羊水上清玻片100个随机分成4组，最后一次固定后，将玻片放置于相应的温度、湿度条件下进行核型的分散，A组20℃，40%;B组20℃，50%;C组23℃，40%;D组23℃，50%;80℃烤箱烘烤2 h或55℃烤箱烘烤过夜后胰酶消化G显带；比较上清液原位法和上清液培养瓶法细胞克隆的多少、核型的数量，G显带后优质核型的多少，同时根据温度、湿度分组比较不同组的染色体分散程度的差异。结果：50例羊水培养成功50例，培养成功率100%。和上清液培养瓶法比较，上清液接种于原位玻片法不同的细胞克隆易于区分，细胞克隆较多，中期分裂相较多，获取的优质核型较多。A、B、C组原位玻片核型分散程度的得分（57.40±8.53）(65.16±11.90)(63.44±8.93)分明显低于D组（78.16±8.65）分，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：上清液接种于原位玻片法细胞克隆较多，可以避免培养瓶法收获后滴片造成的染色体丢失，上清液原位玻片法可以获取更多的优质核型，在进行染色体分散的过程中，将玻片放置在合适的温度（23℃）、湿度（50%）环境中，可以保证载玻片上的染色体核型质量。

关键词

原位培养 / 上清液 / 温度 / 湿度 / 染色体核型