骨髓间充质干细胞分化的造血细胞对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠的造血功能的影响

摘要

目的：在胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM)可诱导骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)向造血细胞分化的基础上，探讨BM-MSCs分化的造血细胞对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠的造血功能的影响。方法：将24只Balb/c小鼠随机分组，设置空白对照组及40、60、80 mg/kg 3个CTX注射剂量组，连续腹腔注射8 d,通过红细胞、白细胞水平检测，脾脏指数的测定，确定短期造模最适的CTX剂量。采用全骨髓法联合差速贴壁法从SD大鼠骨髓获取BM-MSCs,选用孕12.5～14.5 d的Balb/c小鼠，取胎肝组织培养胎肝基质细胞并制备FLSC-CM,体外诱导BM-MSCs向造血细胞分化，分为BM-MSCs组、IL-6+SCF+BM-MSCs组和FLSC-CM+BM-MSCs组。收集诱导的细胞经尾静脉注射模型小鼠体内，通过测定红细胞、白细胞水平、脾脏指数、粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)以及骨髓病理学形态等评估小鼠的造血功能。结果：构建CTX所致骨髓抑制小鼠模型，与对照组相比，各实验组红细胞在第6、9天均明显降低(P<0.01);其中80 mg/kg组在第3～9天持续明显降低(P<0.01)。白细胞在所有实验组第1～3天均明显下降(P<0.01);第6、9天，40 mg/kg和60 mg/kg组白细胞回升并高于对照组，60 mg/kg组更显著(P<0.05～P<0.01);80 mg/kg组白细胞虽有回升，但仍低于对照组水平，差异无统计学意义(P>0.05)。体外诱导BM-MSCs向造血细胞分化8 d后，镜下观察漂浮的细胞FLSC-CM+BM-MSCs组多于其他2组。移植诱导的细胞后第6天，各组外周血中的红细胞、白细胞水平从高到低依次为FLSC-CM+BM-MSCs组、IL-6+SCF+BM-MSCs组、BM-MSCs组，其中FLSC-CM+BM-MSCs组的白细胞水平在第6天明显升高(P<0.01)。CFU-GM集落形成数目从高到低顺序与外周血细胞水平一致，与BM-MSCs组比较，FLSC-CM+BM-MSCs组和IL-6+SCF+BM-MSCs组差异均有统计学意义(P<0.05);脾脏指数从高到低顺序则相反，但差异无统计学意义(P>0.05);骨髓切片显示，相较于其他2组，FLSC-CM+BM-MSCs组有核细胞显著增多。结论：80 mg/kg CTX更适用于短期构建小鼠骨髓抑制模型，FLSC-CM诱导BM-MSCs分化的细胞能够改善CTX所致骨髓抑制小鼠的造血功能。

关键词

胎肝基质细胞 / 骨髓间充质干细胞 / 环磷酰胺 / 造血细胞 / 分化