SAT1介导的巨噬细胞极化参与类风湿关节炎滑膜炎的机制研究

摘要

目的：探究亚精胺/精胺N1–乙酰转移酶–1(SAT1)介导的巨噬细胞极化在类风湿关节炎（RA)发病机制中的作用。方法：实验采用RAW264.7细胞，设置以下分组：对照组为正常培养的细胞；M1极化诱导组通过添加100 ng/mL脂多糖（LPS）和20 ng/mL干扰素γ(IFN–γ)处理24 h;M2极化诱导组通过添加20 ng/mL白细胞介素（IL）–4处理24 h;LPS+IFN–γ+SAT1抑制剂组在添加LPS和IFN–γ的同时，加入SAT1抑制剂处理24 h;IL–4+SAT1抑制剂组在添加IL–4的同时，加入SAT1抑制剂处理24 h。通过CCK–8法评估细胞活力；ELISA测定细胞因子分泌；实时定量PCR检测基因表达；Western blotting技术分析蛋白表达；免疫荧光染色识别巨噬细胞极化标志物；流式细胞术分析巨噬细胞表面标志物。结果：与对照组相比，M1极化诱导组细胞存活率下降（P<0.05），而M2极化诱导组细胞存活率变化无统计学意义（P > 0.05）;LPS+IFN–γ+SAT1抑制剂组和IL–4+SAT1抑制剂组细胞存活率均高于相应的极化诱导组，差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，M1极化诱导组中IL–1β、IL–6、TNF–α的光密度（OD）值增加（P<0.05）,IL–10的OD值变化差异无统计学意义（P >0.05）;M2极化诱导组中IL–1β、IL–6、TNF–α的OD值降低，IL–10的OD值增加，差异均有统计学意义（P<0.05）。相较于对照组，M1极化诱导组显示出诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和SAT1的mRNA表达水平增加，而精氨酸酶1(Arg–1)的mRNA表达水平则下降；相反，在M2极化诱导组中，Arg–1的mRNA表达水平提升，而i NOS和SAT1的mRNA表达水平则减少；进一步地，M1极化诱导组中iNOS、p–STAT6和SAT1蛋白的表达水平提高，Arg–1蛋白的表达水平降低；而在M2极化诱导组中，Arg–1蛋白的表达水平提高，iNOS、p–STAT6和SAT1蛋白的表达水平则降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：SAT1抑制剂能够抑制与M1极化相关的基因和蛋白表达，同时促进M2极化相关基因和蛋白的表达，SAT1可能成为治疗RA的潜在靶点。

关键词

类风湿关节炎 / 巨噬细胞极化 / 多胺代谢酶亚精胺/精胺N1–乙酰转移酶–1