EGFL6调控血管生成–成骨偶联在骨质疏松性骨缺损修复中的作用机制

摘要

目的：探究表皮生长因子样结构域蛋白6(EGFL6)调控血管生成–成骨偶联对骨质疏松性骨缺损（OP–BD）修复的影响及可能作用机制。方法：培养骨髓间充质干细胞（BMSCs），分为对照组、EGFL6–50 ng/mL组、EGFL6–200 ng/mL组及EGFL6–500 ng/mL组。培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分为对照组、EGFL6–200 ng/mL组、BMSCs培养液组及EGFL6–200 ng/mL+BMSCs培养液组。将30只大鼠分为假手术组、OP–BD+L–EGFL6组及OP–BD+H–EGFL6组，每组10只。碱性磷酸酶（ALP）染色试剂盒检测ALP活性。ARS染色检测细胞钙盐沉积水平。免疫荧光染色检测成骨标志物骨钙素（OCN）与血管生成标志物血管内皮生长因子（VEGF）。RT–qPCR检测血管生成因子血管生成素（Ang）–2及Ang–4 mRNA水平。Transwell实验检测细胞侵袭能力。血管形成检测管状结构的数量变化。HE染色检测骨缺损病理变化。免疫组织化学染色检测OCN、VEGF及CD31表达水平。结果：与对照组相比，EGFL6–50 ng/mL组、EGFL6–200 ng/mL组及EGFL6–500 ng/mL组BMSCs成骨相关标志物ALP活性增加，钙盐沉积增加，OCN表达增加（P<0.05），血管生成相关标志物VEGF蛋白表达增加，Ang–2及Ang–4 mRNA表达增加（P<0.05），且EGFL6–200 ng/mL对BMSCs作用的效果更明显，用于后续研究。与对照组相比，EGFL6–200 ng/mL组HUVECs的侵袭能力与管状结构数量无显著性变化（P > 0.05）,BMSCs培养液组与EGFL6–200 ng/mL+BMSCs培养液组HUVECs的侵袭能力与管状结构数量增加（P<0.05），且EGFL6–200 ng/mL+BMSCs培养液组HUVECs的侵袭能力与管状结构数量增加更明显。与对照组相比，OP–BD+L–EGFL6组大鼠胫骨骨缺损区域骨小梁断裂，数量减少，骨髓腔增大，OCN、VEGF及CD31表达增加；与OP–BD+L–EGFL6组相比，OP–BD+H–EGFL6组大鼠胫骨骨缺损区域骨小梁断裂减少，数量增加，骨髓腔减小，OCN、VEGF及CD31表达增加。结论：EGFL6可通过调控血管生成–成骨偶联促进OP–BD修复。

关键词

骨质疏松 / 骨缺损 / 表皮生长因子样结构域蛋白6 / 血管生成–成骨偶联