miR-155靶向SMAD2在小鼠狼疮肾炎足细胞损伤和炎性反应中的影响

摘要

目的：探讨miR-155调控SMAD2表达对小鼠狼疮性肾炎足细胞损伤以及炎性反应中的影响。方法：实验小鼠随机分为空白组、模型组、 AAV9-miR-155组、AAV9-miR-NC组、AAV9-miR-anti组和AAV9-miR-anti-NC组，每组8只，其中空白组为C57BL/6小鼠，其余组均为MRL/lpr小鼠，并在此基础上对各组进行相应处理和取样。通过在线靶基因预测网站Target genes对miR-155与SMAD2是否存在结合位点进行预测。双荧光素酶报告基因分析系统预测验证miR-155与SMAD2的靶向关系。考马斯亮蓝法检测各组小鼠24 h尿蛋白含量。苏木精-伊红染色法染色观察小鼠肾脏组织。qRT-PCR检测各组肾组织中miR-155水平上的表达。Western blot检测肾组织中nephrin、P-cadherin和SMAD2蛋白表达。免疫荧光实验检测小鼠炎性因子（IL-6、TNF-α）的荧光强度。结果：与空白组相比，模型组小鼠尿蛋白升高，肾脏病理损伤严重，肾组织的miR-155上调，并且nephrin、P-cadherin和SMAD2蛋白表达水平下降（P<0.05），而IL-6、TNF-α荧光强度增强。与模型组、AAV9-miR-NC组相比，AAV9-miR-155组小鼠模型组小鼠尿蛋白升高，肾脏病理损伤明显，肾组织miR-155升高明显，nephrin、P-cadherin和SMAD2表达水平下降（P<0.05），而IL-6、TNF-α荧光强度增强明显；与模型组、AAV9-miR-anti-NC组相比，AAV9-miR-anti组与模型组相比小鼠尿蛋白下降，肾脏病理损伤改善，miR-155表达降低，nephrin、P-cadherin和SMAD2表达水平升高（P<0.05），而IL-6、TNF-α荧光强度下降；模型组、AAV9-miR-NC组、 AAV9-miR-anti-NC组小鼠则上述指标的差异无统计学意义（P>0.05）。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-155可抑制野生型SMAD2细胞的荧光活性，靶向调控SMAD2的表达。结论：高表达miR-155可通过调控SMAD2加重小鼠足细胞损伤和狼疮肾炎的炎性反应，而抑制miR-155表达可减轻小鼠足细胞损伤和炎性反应。

关键词

miR-155 / SMAD2 / 足细胞损伤 / 狼疮性肾炎

基金资助

国家自然科学基金资助项目（81860131,82060133）; 广西自然科学基金资助项目（2017GXNSFAA198288,2019GXNSFDA245004）