Circ＿ZFYVE1对胰岛β细胞周期和自噬的影响

摘要

目的：观察Circ＿ZFYVE1(cZFYVE1)对小鼠胰岛β细胞（MIN6）周期和自噬的影响。方法：Sanger测序分析验证cZFYVE1的环化位点；MIN6细胞分为正常组（NC，含葡萄糖浓度5.5 mmol/L）、高糖1组（HG1，含葡萄糖浓度15 mmol/L）和高糖2组（HG2，含葡萄糖浓度25 mmol/L）进行培养48 h,qRT-PCR法检测NC组、HG1组和HG2组cZFYVE1表达水平；慢病毒转染实验构建空载体组（sh-NC）、稳定过表达cZFYVE1组（circ-ZFYVE1）和稳定敲低cZFYVE1组（si-cZFYVE1）。qRT-PCR法检测转染后各组MIN6细胞中cZFYVE1基因的表达量；流式细胞术检测各组细胞周期百分率；透射电子显微镜观察各组细胞自噬小体和细胞器的变化；免疫荧光法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1荧光强度；Western Blot法检测各组细胞周期调节蛋白Cyclin D1以及自噬相关蛋白Beclin-1、P62和LC3-Ⅱ的表达水平。结果：Sanger测序证实cZFYVE1存在环化剪接位点。qRT-PCR结果显示，与NC组相比，HG1组和HG2组cZFYVE1表达水平降低，HG2组cZFYVE1水平较HG1组表达降低（P<0.01）。与sh-NC组比较，circ-ZFYVE1组cZFYVE1表达升高，si-cZFYVE1组cZFYVE1表达降低（P<0.01）。流式细胞术结果显示，与sh-NC组比较，circ-ZFYVE1组G1期细胞百分率降低，S期细胞百分率升高，G2期细胞百分率升高，si-cZFYVE1组G1期细胞百分率升高，S期细胞百分率降低，G2期细胞百分率降低（P<0.01）。透射电镜结果显示，与sh-NC组比较，si-cZFYVE1组自噬体减少。免疫荧光结果显示，与sh-NC组比较，circ-ZFYVE1组自噬相关蛋白Beclin-1免疫荧光强度升高，si-cZFYVE1组Beclin-1免疫荧光强度降低（P<0.01）。Western blot结果显示，与sh-NC组比较，circ-ZFYVE1组细胞周期调节蛋白Cyclin D1表达水平升高，自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平升高，P62表达水平降低，si-cZFYVE1组Cyclin D1蛋白表达水平降低，Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低，P62蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：Circ＿ZFYVE1可能促进MIN6胰岛β细胞自噬并影响细胞周期。

关键词

Circ＿ZFYVE1 / 胰岛β细胞 / 细胞周期 / 自噬