肝宁方对肝细胞癌的影响及作用机制初探

摘要

目的：研究肝宁方对肝细胞癌的作用并初步探讨其作用机制。方法：细胞实验：将40只SD大鼠予肝宁方灌胃7 d后提取含药血清。采用CCK8检测肝宁方含药血清浓度分别为5%、10%、20%、30%时对人肝癌细胞HepG2活力的影响。将HepG2细胞分为空白组和肝宁方组含药血清组，使用5%肝宁方含药血清干预24 h后提取蛋白进行质谱前处理，再进行DIA定量蛋白质组学分析，包括建立图谱数据库和DIA数据采集及分析，最后采用蛋白免疫印迹（WB）技术验证TAGLN蛋白表达水平。动物实验：10只BALB/c裸小鼠分为模型组和肝宁方组，予皮下注射人肝癌细胞MHCC-97H构建肝癌异种植瘤模型，造模成功后给予0.9%生理盐水或肝宁方灌胃，连续给药14 d。造模开始到给药结束，每隔1周测量皮下肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，给药结束后剥离肿瘤，采用苏木精-伊红（HE）染色法检测肿瘤组织病理学情况。结果：细胞实验：肝宁方含药血清呈剂量依赖性降低HepG2细胞活力（P<0.05,P<0.01），选用5%肝宁方含药血清进行后续实验。DIA定量蛋白质组学分析结果发现36个上调蛋白，23个下调蛋白（P<0.05）,GO富集分析显示细胞组分、细胞功能及生物学过程等。KEGG富集分析表明差异蛋白与补体和凝血级联反应、PPAR信号通路等关系密切。Reactome富集分析显示了包括血小板α颗粒含量的胞吐作用在内的20条信号通路。PPI网络分析发现TGFB1、SERPINE1、TAGLN等38种蛋白位于网络节点。WB结果发现肝宁方含药血清组TAGLN蛋白表达比空白组明显上调（P<0.01）。动物实验：通过肝癌裸鼠皮下肿瘤模型发现肝宁方能够抑制肿瘤生长（P<0.05）,HE染色结果提示肝宁方可促进肿瘤坏死。结论：肝宁方能抑制HepG2细胞增殖及HCC肿瘤增长，促进肿瘤组织坏死，其作用机制涉及多个生物进程和信号通路，其中可能与调控TAGLN蛋白表达有关。

关键词

肝宁方 / 肝癌 / 蛋白质组学 / TAGLN蛋白表达

基金资助

广西自然科学基金（2021GXNSFBA220037）; 广西中医药大学“桂派中医药传承创新团队”（2022B004）;广西中医药大学全国名老中医黄汉儒学术思想与临床诊疗传承发展推广中心（2022V004）