鳖甲煎丸含药血清抑制胰腺癌AsPC-1细胞恶性生物学行为及机制研究

摘要

目的：探讨鳖甲煎丸（BJJP）含药血清对胰腺癌AsPC-1细胞恶性生物学行为的影响及其可能的分子机制。方法：采用72只健康Sprague-Dawley(SD)大鼠制备正常大鼠血清以及低（0.55 g/kg）、中（1.1 g/kg）、高（2.2 g/kg）剂量的鳖甲煎丸含药血清。将对数生长期的胰腺癌AsPC-1细胞分为空白对照组（BC）、正常大鼠血清处理组（NC）以及低、中、高剂量的鳖甲煎丸含药血清处理组（BJJP-L、BJJP-M、BJJP-H），各组用10%相应血清处理细胞48 h后进行后续实验。H&E染色评估鳖甲煎丸对健康SD大鼠肝脏、肾脏和心脏组织学变化的影响。CCK-8检测AsPC-1细胞增殖；集落形成实验检测AsPC-1细胞集落形成；TUNEL实验检测AsPC-1细胞凋亡；划痕实验检测AsPC-1细胞迁移；Transwell实验检测AsPC-1细胞迁移和侵袭；Western blot实验检测AsPC-1细胞中增殖相关蛋白（Ki-67、PCNA）、凋亡相关蛋白（Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-xl、Bcl-2）、上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT）的表达水平；免疫荧光实验检测AsPC-1细胞中EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的荧光强度。超高效液相色谱-串联静电场轨道阱质谱联用（UHPLC-MS/MS）技术检测鳖甲煎丸含药血清的入血成分。结果：H&E染色显示低、中、高剂量的鳖甲煎丸对健康SD大鼠的主要脏器无毒副作用。与NC组相比，低、中、高剂量的鳖甲煎丸含药血清组细胞的OD值、集落形成数量、划痕愈合率、迁移数量、侵袭数量、Ki-67、PCNA、Bcl-xl、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平以及N-cadherin和Vimentin荧光强度均显著降低；TUNEL凋亡率、Caspase 3、Caspase 9、Bax、E-cadherin蛋白表达水平及E-cadherin荧光强度均显著升高（P<0.05）。UHPLC-MS/MS检测结果显示鳖甲煎丸含药血清中共有67种入血原型成分，其中包括高熊果苷、槲皮素和苍术素等30种有效成分。结论：鳖甲煎丸含药血清可抑制胰腺癌AsPC-1细胞的恶性生物学行为，其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

关键词

鳖甲煎丸 / 胰腺癌 / 增殖 / 上皮-间充质转化 / PI3K/AKT信号通路