基于转录组学分析氟维司群治疗对单核-巨噬细胞趋化因子表达及极化的影响

摘要

目的：肿瘤细胞获得对内分泌治疗药物的耐受性是ER⁺乳腺癌治疗失败的关键因素。肿瘤相关巨噬细胞是乳腺癌微环境中的重要成分，然而内分泌治疗药物对巨噬细胞的调控作用尚不清楚，本研究旨在探讨内分泌治疗药物氟维司群对单核-巨噬细胞极化的影响。方法：借助PMA诱导获得THP-1细胞来源的巨噬细胞，通过RT-qPCR、Western blot、流式细胞术验证氟维司群刺激后的巨噬细胞表面marker变化；通过RNA-Seq技术对氟维司群刺激后的巨噬细胞的转录组改变进行分析，筛选组间差异表达基因；结合GO功能与KEGG通路富集分析差异基因的功能；构建差异基因的蛋白相互作用网络并筛选Hub基因；最后通过RT-qPCR和趋化因子阵列实验验证氟维司群对巨噬细胞Hub基因中5种趋化因子表达的影响。结果：RT-qPCR、Western blot、流式细胞术分析结果表明氟维司群刺激后的巨噬细胞M2相关标志分子表达升高而M1相关标志分子表达降低；RNA-Seq结果显示，氟维司群刺激后的巨噬细胞出现118个差异表达基因；GO与KEGG富集分析结果显示差异基因富集于趋化因子相关功能和信号通路；蛋白互作网络和Hub基因筛选确定了CXCL8、CCL20、CCL22、CXCL10、CCL7 5个关键的趋化因子；对5个关键趋化因子进行RT-qPCR验证表明其表达趋势与RNA-Seq结果一致；趋化因子阵列实验证实氟维司群刺激后的巨噬细胞分泌的CXCL8、CCL20、CCL22增多，而CXCL10、CCL7减少。结论：内分泌治疗药物氟维司群使巨噬细胞M2相关分子CD206表达升高而M1相关分子CD86表达降低，同时使巨噬细胞M2相关趋化因子分泌增多而M1相关趋化因子分泌减少，提示氟维司群促进巨噬细胞向M2极化，抑制其向M1极化，可能与临床内分泌治疗耐药形成有关。

关键词

乳腺癌 / 内分泌治疗耐药 / 巨噬细胞 / 趋化因子