益肺宣肺降浊方调控miR-485/AIM2炎症小体途径治疗血管性痴呆的机制研究

摘要

目的：研究miR-485/黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎症小体途径在血管性痴呆（VaD）中的作用，并探讨益肺宣肺降浊方治疗VaD的作用机制。方法：双侧颈总动脉永久性结扎法建立VaD大鼠模型，分为模型组及益肺宣肺降浊方组，并设假手术组，采用高通量测序分析差异表达的miRNA，并通过在线数据库预测miRNA的靶基因，双萤光素酶报告基因实验进行验证。基于miR-485采用动物实验进一步研究，将同法造模的大鼠分为假手术组、模型组、益肺宣肺降浊方组、miR-485过表达组、益肺宣肺降浊方+miR-485过表达组，并设假手术组。益肺宣肺降浊方组及益肺宣肺降浊方+miR-485过表达组予益肺宣肺降浊汤灌胃，假手术组和模型组大鼠每日予相等体积的生理盐水进行灌胃。miR-485过表达组和益肺宣肺降浊方+miR-485过表达组予注射1.5μL病毒载体至大鼠双侧海马。采用水迷宫实验评价大鼠学习及空间记忆能力；苏木素-伊红染色及透射电镜观察海马组织形态及神经元超微结构；免疫印迹法检测AIM2、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应分析相关基因的mRNA水平以及miR-485的表达水平。结果：miR-485存在于3组大鼠的共同异表达中，AIM2是miR-485的靶基因。动物实验发现，假手术组偶见神经元死亡，模型组大鼠海马神经元损伤严重，其余3组神经元损伤较模型组明显改善，其中益肺宣肺降浊方+miR-485过表达组改善最明显。模型大鼠学习及空间记忆能力明显下降，海马组织miR-485水平下降，AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平及mRNA水平升高（P<0.05）；与模型组相比，益肺宣肺降浊方组、miR-485过表达组以及益肺宣肺降浊方+miR-485过表达组的学习及记忆能力均显著改善，并伴随miR-485水平的升高以及AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白水平及mRNA水平下降（P<0.05）。结论：miR-485能够抑制AIM2炎症小体活化，改善VaD大鼠的学习和记忆能力；益肺宣肺降浊方治疗VaD的作用与调控miR-485/AIM2炎症小体途径、减轻神经炎症及减少神经元死亡有关。

关键词

益肺宣肺降浊方 / 血管性痴呆 / miR-485 / 黑色素瘤缺乏因子2炎症小体