PDLSC-Exo对牙周膜干细胞迁移和成纤维分化的作用研究

张宁; 胡月; 时小婷; 曹楠珏; 刘克达; 孟圆; 王蔚

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20241017.002

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (17) : 1336 -1343. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241017.002

PDLSC-Exo对牙周膜干细胞迁移和成纤维分化的作用研究

张宁, 胡月, 时小婷, 曹楠珏, 刘克达, 孟圆, 王蔚

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摘要

目的：探究牙周膜干细胞来源外泌体（exosomes derived from periodontal ligament stem cells,PDLSC-Exo）对牙周膜干细胞迁移和成纤维分化的作用。方法：酶消化法提取PDLSCs；超速离心法提取PDLSC-Exo，应用透射电镜、纳米颗粒示踪和Western blot进行鉴定；PDLSCs经20μg/mL PDLSC-Exo处理后，MTT和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞活力和细胞凋亡水平，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，qRT-PCR检测细胞成纤维分化能力，Western blot检测PDLSCs中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/SMAD3信号水平；细胞划痕实验检测抑制SMAD3磷酸化后，PDLSC-Exo对细胞迁移的影响。结果：PDLSCs光镜下呈长梭形贴壁生长，具有成骨和成脂向分化能力，阳性表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90和CD105，不表达造血干细胞表面标记物CD31和CD45;PDLSC-Exo透射电镜下呈杯状囊泡结构，直径为30～150 nm，阳性表达外泌体特异性标记蛋白Alix和CD63，不表达细胞内质网特异性蛋白Calnexin;PDLSC-Exo处理组中PDLSCs细胞活性升高，细胞凋亡呈下降趋势，成纤维相关基因COL1和FAP表达增加，细胞划痕愈合率呈增加趋势，TGF-β经典信号P-SMAD2/3水平上调；SMAD3磷酸化抑制后，下调了PDLSC-Exo促进的PDLSCs细胞迁移能力。结论：PDLSC-Exo可能通过TGF-β/SMAD3信号通路促进牙周膜干细胞迁移和成纤维分化能力。