基于网络药理学和细胞实验探究健脾活血方干预AMPK和Hippo糖脂代谢信号通路治疗肝纤维化研究

摘要

目的：网络药理学和实验探究健脾活血方干预肝纤维化的作用靶点及机制。方法：检索TCMSP获得健脾活血方各药物的活性成分；检索GeneCards、OMIM、TTD和DrugBank数据库预测肝纤维化疾病靶点；活性成分与靶点交集预测健脾活血方治疗肝纤维化靶点。运用Cytoscape 3.8.0构建“药物-成分-靶点-疾病”网络；运用STRING数据库以0.700为标准构建蛋白质-蛋白质互作网络；运用R软件进行GO富集和KEGG通路富集分析。实验选取人星状细胞LX-2培养，分为空白对照组、模型组[使用5ng转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1, TGF-β1)诱导]和观察组（5 ng TGF-β1诱导+健脾活血方干预），CCK-8法检测中药干预细胞最佳浓度，免疫印迹法（Western Blot, WB）检测各组肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1, Timp-1)、结蛋白（Desmin）、胶原蛋白I(Collagen I)表达，WB检测各组AMPK和Hippo信号通路蛋白表达。结果：筛选出114个主要活性成分，涉及146个基因靶点，其中主要活性成分包括木樨草素、槲皮素、β-谷甾醇、当归素、白桦酸等；核心靶点基因包括TNF、IL-6、PTGS2、TP53、MAPK1、JUN、ESR1等；富集到GO生物过程661个、细胞组分467个、分子功能115个，包括AMPK、TNF、Hippo等KEGG信号通路164条。CCK-8结果表明0.625 mg/mL和1.25 mg/mL健脾活血方干预LX-2细胞增殖最佳；WB结果表明相比空白对照组，模型组α-SMA、Collagen I、Desmin、Timp-1表达增高，相比模型组，观察组α-SMA、Collagen I、Desmin、Timp-1表达降低（P<0.05）;WB结果表明相比空白对照组，模型组p-YAP、p-TAZ和p-AMPK表达降低，YAP、TAZ、AMPK表达升高，相比模型组，观察组p-YAP、p-TAZ和p-AMPK表达增高，YAP、TAZ、AMPK表达降低（P<0.05）。结论：健脾活血方治疗肝纤维化的机制与健脾活血方多成分多靶点干预AMPK和Hippo信号通路等多通路相关。

关键词

健脾活血方 / 肝纤维化 / 网络药理学 / AMPK/Hippo信号通路