消瘀散精简方新组方凝胶贴透皮成分的探究及其对骨关节炎大鼠软骨损伤和滑膜炎的治疗作用

摘要

目的：研究消瘀散精简方新组方凝胶贴对骨关节炎（osteoarthritis,OA）大鼠的透皮吸收成分以及治疗作用和生物安全性。方法：通过Franz扩散池法模拟皮肤透皮吸收过程，采用超高效液相色谱?高分辨质谱联用方法（UPLC?Q?TOF/MS）对消瘀散精简方新组方凝胶贴透皮接受液进行成分分析；将24只大鼠分为假手术组、OA模型组、阳性对照组（氟比洛芬凝胶贴）、实验组（消瘀散精简方新组方凝胶贴）4组，每组6只，除假手术组外其余组通过前交叉韧带横断术（anterior cruciate ligment transection,ACLT）建立OA大鼠模型，造模后1周将消瘀散精简方新组方凝胶贴作为实验药物外敷于大鼠膝关节，连续用药21 d后收集眼眶血及膝关节标本，利用苏木精?伊红（hematoxylin?eosin,H&E）染色法和番红?固绿（safranin O?fast green,Safranin O）染色法分析各组大鼠膝关节软骨损伤严重程度；利用H&E染色法评估大鼠膝关节滑膜炎严重程度；采用免疫组化法检测各组软骨中Ⅱ型胶原（collagen typeⅡalpha 1,Col2a1）、基质金属蛋白酶13(matrix metallopeptidase 13,MMP13)与半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)的表达及各组滑膜中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）、肿瘤坏死因子?α(tumour necrosis factor alpha ,TNF?α)的表达；利用酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分析各组大鼠血清炎症因子TNF?α、白介素?17(interleukin 17,IL?17)水平，利用H&E染色分析各组大鼠组织器官结构评估生物安全性。结果：（1）消瘀散精简方新组方凝胶贴透皮成分含有28种原型成分，包含君药大黄中的6?甲基?大黄酸、大黄酸。（2）经过21 d外敷治疗后消瘀散精简方新组方凝胶贴与氟比洛芬凝胶贴可治疗OA大鼠关节软骨损伤和滑膜炎症，并且消瘀散精简方新组方凝胶贴的治疗效果更优。消瘀散精简方新组方凝胶贴组大鼠膝关节软骨Col2a1的表达明显上调，MMP13与Caspase 3的表达被明显抑制（P<0.05）。（3）应用氟比洛芬凝胶贴膏与消瘀散精简方新组方凝胶贴治疗后能缓解大鼠滑膜炎症，免疫组化染色进一步表明消瘀散精简方新组方凝胶贴组大鼠滑膜TNF?α和iNOS的表达明显下调（P<0.05）。（4）ELISA结果表明OA发生、发展过程及消瘀散精简方新组方凝胶贴治疗过程中不会引起全身性的炎症因子TNF?α、IL?17上调，同时消瘀散精简方新组方凝胶贴外敷治疗后各组大鼠组织器官的微观结构正常且无明显炎症浸润。结论：消瘀散精简方新组方凝胶贴透皮成分包含君药大黄中的6?甲基?大黄酸、大黄酸等，消瘀散精简方新组方凝胶贴通过促进关节软骨基质合成，抑制软骨细胞凋亡和滑膜炎症因子表达治疗OA，同时还具有良好生物安全性。有望进一步通过安全性和有效性评估以推进临床转化。

关键词

骨关节炎 / 软骨损伤 / 滑膜炎 / 透皮消瘀散精简方新组方凝胶贴