结合生物信息学探究磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1对胆管癌细胞生物学行为的影响及机制

严华悦; 周汉旭; 王胜威; 杨立春; 刘子祥; 贾建光

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20241209.001

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (12) : 928 -937. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241209.001

结合生物信息学探究磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1对胆管癌细胞生物学行为的影响及机制

严华悦, 周汉旭, 王胜威, 杨立春, 刘子祥, 贾建光

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摘要

目的：本研究旨在结合生物信息学探讨磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(phosphoenolpyruvate carboxykinase 1,PCK1)在胆管癌细胞中的表达，及其对胆管癌细胞增殖、迁移的影响和潜在机制。方法：基于GEO数据库中胆管癌mRNA测序数据筛选差异表达基因。通过STRING网站及Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质互相作用网络（PPI网络），并筛选关键调控网络及基因。通过TCGA数据库及HPA数据库验证关键基因表达量及病理学特征。通过KEGG及GSEA富集分析探究差异基因相关功能及PCK1相关通路。细胞学实验中采用慢病毒转染胆管癌RBE细胞株以过表达PCK1，采用RT-qPCR及蛋白质印迹法验证转染效率。将实验分为阴性对照组（RBE组）、空转组（RBE-NC组）、过表达组（RBE-OE组）及PPARγ抑制剂组（RBE-OE+GW9662组）。采用集落形成实验及CCK8法检测细胞增殖能力，采用划痕愈合实验及Transwell实验检测细胞迁移能力，采用蛋白质印迹检测通路蛋白表达水平。结果：生物信息学分析显示PCK1可以作为胆管癌的关键调控基因，在癌组织中表达水平较低，可能通过PPAR通路发挥作用。细胞学实验显示：RBE细胞经转染后，PCK1 mRNA和蛋白表达水平显著升高。与阴性对照组相比，过表达PCK1抑制RBE细胞体外增殖和迁移能力，同时PPARγ、PTEN蛋白表达升高，而p-mTOR/mTOR水平降低，而抑制剂组则可逆转上述趋势。结论：PCK1可以作为胆管癌的关键调控基因，并可能通路激活PPARγ/PTEN/mTOR信号通路抑制胆管癌增殖及迁移。