电针血清对氧糖剥夺/复氧糖后HT22神经元铁死亡的影响

摘要

目的：观察电针血清对氧糖剥夺/复氧糖（OGD/R）后HT22神经元铁死亡的影响，以探讨电针血清对脑缺血后海马神经元潜在的保护机制。方法：将20只雄性SD大鼠随机分为正常组和电针组，每组10只。电针组采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型，随后进行为期14 d的电针治疗。治疗结束后，从腹主动脉采血并制备不同浓度的电针血清，同时收集正常组大鼠血清作为对照。以海马神经元HT22细胞为实验对象，将其随机分为5组：正常组、模型组、电针血清组、诱导剂组、电针血清+诱导剂组。除正常组外，其余各组经历4 h的氧糖剥夺后，再进行24 h的复氧复糖处理，并在复氧复糖期间给予相应的血清处理。诱导剂组和电针血清+诱导剂组在氧糖剥夺前24 h加入10μmol/L的铁死亡诱导剂Erastin。采用CCK?8和LDH试剂盒评估细胞活力和毒性；流式细胞术检测细胞凋亡情况；透射电镜观察线粒体结构；荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）含量；比色法试剂盒检测细胞内Fe²⁺、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量；Western blot检测细胞内转铁蛋白受体1（TFR1）、铁蛋白重链多肽1（FTH1）、核受体共激活剂4（NCOA4）、转运蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）和脂氧合酶（LOX）的相对表达量。结果：不同浓度的电针血清（5%、10%、15%、20%）能改善细胞形态并降低细胞毒性（P<0.01），其中10%的浓度效果最佳。与正常组相比，模型组细胞活力降低（P<0.01），细胞毒性和凋亡情况增加（P<0.01），透射电镜显示线粒体肿胀明显，嵴断裂甚至消失，Fe²⁺、MDA、ROS含量升高（P<0.01）,GSH含量降低（P<0.01）,FTH1、SLC7A11、GPX4表达降低（P<0.05）,TFR1、NCOA4、ACSL4、LOX表达升高（P<0.05）。与模型组相比，电针血清组细胞活力升高（P<0.01），细胞毒性以及凋亡情况减少（P<0.05），线粒体形态相对完整，Fe²⁺、MDA、ROS含量下降（P<0.01）,GSH含量升高（P<0.05）,FTH1、SLC7A11、GPX4表达升高（P<0.05）,TFR1、NCOA4、ACSL4、LOX表达降低（P<0.05）。与模型组相比，诱导剂组细胞活力降低（P<0.01），细胞毒性和凋亡情况增加（P<0.01），线粒体肿胀更为明显，结构进一步破坏，Fe²⁺、MDA、ROS含量升高（P<0.01）,GSH含量降低（P<0.01）,FTH1、SLC7A11、GPX4表达降低（P<0.05）,TFR1、NCOA4、ACSL4、LOX表达升高（P<0.05）。与抑制剂组相比，针刺血清+诱导剂组细胞活力升高（P<0.01），细胞毒性以及凋亡情况减少（P<0.01），线粒体形态结构有所改善，Fe²⁺、MDA、ROS含量下降（P<0.01）,GSH含量升高（P<0.01）;FTH1、SLC7A11、GPX4表达升高（P<0.05）,TFR1、NCOA4、ACSL4、LOX表达降低（P<0.05）。结论：电针血清能有效抑制OGD/R后HT22神经元的铁死亡，从而在改善脑缺血后海马神经元损伤方面发挥重要作用。

关键词

电针血清 / 氧糖剥夺/复氧糖(OGD)/R / HT22神经元 / 铁死亡