重楼皂苷Ⅱ与反式肉桂醛调控ROCK/LIMK/cofilin通路抑制子宫腺肌病异位内膜细胞侵袭迁移的机制研究

曹涵; 王子璐; 王楚矗; 石雅馨; 师伟

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20241217.002

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (19) : 1477 -1487. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20241217.002

重楼皂苷Ⅱ与反式肉桂醛调控ROCK/LIMK/cofilin通路抑制子宫腺肌病异位内膜细胞侵袭迁移的机制研究

曹涵, 王子璐, 王楚矗, 石雅馨, 师伟

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摘要

目的:探究重楼皂苷Ⅱ(polyphyllin,PPⅡ)与反式肉桂醛(trans-cinnamaldehyde,TCA)通过调控ROCK/LIMK/cofilin通路抑制子宫腺肌病(adenomyosis,AM)进展的机制。方法:提取人子宫腺肌病异位内膜细胞(adenomyosis-derived cells,AMDC)进行培养,采用CCK-8法检测梯度浓度的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ(PPⅠ、PPⅡ、PPⅦ)及TCA对AMDC活力的影响;采用正交试验设计筛选PPⅡ与TCA(简称PT)的最佳配比;采用Transwell实验和免疫荧光实验检测PT抑制AMDC侵袭、迁移的能力;采用Western blot检测ROCK1、LIMK、p-LIMK、cofilin、p-cofilin的蛋白表达水平;对ICR小鼠腹腔注射梯度浓度的PT 30 d,采用苏木素-伊红染色法观察小鼠肝、脾和肾组织的形态学改变,采用酶联免疫吸附法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)活性。他莫昔芬滴喂新生ICR雌鼠建立AM模型,设置空白对照组、模型组、PT低剂量组、PT高剂量组和阳性药物复方米非司酮组,药物干预30 d,采用H&E染色检测小鼠子宫的形态学改变;采用免疫组化评估子宫组织内ROCK1、p-LIMK、p-cofilin以及KI67的表达水平改变。结果:体外实验结果显示,PPⅡ和TCA抑制AMDC活力效果较好;PT抑制AMDC侵袭、迁移效果最显著(P<0.001),下调ROCK1、LIMK、p-LIMK、cofilin、p-cofilin蛋白表达(P<0.05),抑制AMDC骨架重排(P<0.001)。体内实验结果表明,PT药物未损伤小鼠肝、脾和肾组织形态,不影响血清ALP、BUN活性和AST/ALT比值,能够减轻AM模型小鼠子宫内膜腺体向肌层侵袭的数量,降低AM小鼠子宫组织中ROCK1、p-LIMK、p-cofilin和KI67的表达水平(P<0.05)。结论:PT可通过调控ROCK/LIMK/cofilin通路抑制AM腺体向肌层的侵袭和迁移,延缓AM进展。