益肺通络方对肺纤维化模型大鼠IL-17A影响的研究

摘要

目的：通过博来霉素气管滴入法构建肺纤维化动物模型，探讨益肺通络方对模型大鼠IL-17A的影响。方法：采用博来霉素气管滴入法构建SD大鼠肺纤维化模型，随机分为：空白对照组、模型组、强的松组、益肺通络方低剂量组和益肺通络方高剂量组，分别给予对应的干预，共干预14 d，取大鼠血清和肺组织做检测。通过肺组织形态学观察、MicroCT影像学观察、H&E染色及Masson染色评估大鼠肺纤维化程度，通过免疫组化分析α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和波形蛋白（vimentin protein,Vimentin）等肺纤维化相关蛋白表达，通过免疫荧光检测IL-17A等信号分子表达，通过ELISA检测大鼠血清羟脯氨酸（hydroxyproline, HYP）分泌水平及测定细胞因子IL-17A含量，通过PCR检测IL-17A mRNA相对表达，Western blot检测IL-17A蛋白表达。结果：大鼠肺组织形态观察显示益肺通络方对大鼠双肺外观、颜色、肺叶轮廓、体积弹性有明显改善作用。胸部MicroCT影像学观察显示益肺通络方能够减轻大鼠肺部炎症程度、改善纤维化征象表现。大鼠肺组织HE染色显示益肺通络方可以减轻肺组织炎症细胞浸润等病理特征。大鼠肺组织Masson染色显示益肺通络方能够改善肺组织纤维细胞和组织增生。免疫组化结果显示与空白对照组相比，模型组大鼠肺组织α-SMA、Vimentin平均阳性面积占比明显升高（P<0.05）；与模型组相比，益肺通络方组大鼠肺组织α-SMA平均阳性面积占比均明显降低（P<0.01），尤其在高剂量益肺通络方干预后大鼠肺组织Vimentin平均阳性面积占比明显降低（P<0.05）。免疫荧光图像显示与空白对照组相比，模型组大鼠肺组织IL-17A荧光强度高，在益肺通络方干预后荧光强度明显降低。ELISA结果显示与空白对照组相比，模型组大鼠HYP、IL-17A含量明显升高（P<0.05）；与模型组相比，益肺通络方组大鼠上述细胞因子含量均明显降低（P<0.05）。PCR结果显示与空白对照组相比，模型组大鼠明显上调IL-17A mRNA相对表达（P<0.05）；与模型组相比，益肺通络方组大鼠IL-17A mRNA相对表达明显减少（P<0.05）。Western blot检测结果显示与空白对照组相比，模型组大鼠肺组织IL-17A蛋白表达明显升高（P<0.05）；与模型组相比，益肺通络方可明显抑制上述蛋白表达（P<0.05）。结论：益肺通络方对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠具有保护作用。益肺通络方可能通过下调IL-17A分泌改善大鼠肺纤维化。

关键词

肺纤维化 / 益肺通络方 / IL-17A / 实验研究