金水缓纤方通过p53-KRT8信号通路减轻HPAEPICS细胞衰老和分化障碍改善肺纤维化的作用机制

摘要

目的：探讨金水缓纤方通过调控p53-KRT8信号通路减轻人Ⅱ型肺泡上皮细胞株HPAEPIC细胞衰老和分化障碍以改善博来霉素（bleomycin,BLM）诱导的肺纤维化的作用机制。方法：采用0.63??g/mL BLM诱导HPAEPIC细胞48 h构建细胞肺纤维化模型，分为空白组（CON组）、模型组（MOD组）、金水缓纤方组（JHF组，10%）、吡非尼酮组（PFD组，20??g/mL）和p53抑制剂组（Pifithrin-α HBr抑制剂，PFT-α组，10??mol/L）。CCK-8检测细胞活力；RT-PCR检测细胞IL??6、IL??8、p21、p53、SPC、KRT8、IL??13 mRNA的表达水平；流式细胞术检测细胞周期；Western blot检测p53、KRT8、CLDN4、N-CAD、α-SMA蛋白表达水平；免疫荧光检测p53 、p21 、KRT8表达水平。结果：与CON组相比，MOD组细胞G1期百分比和G1/G2比值明显降低（P<0.01）,G2期百分比明显升高（P<0.01）;IL??6、IL??8、p21、p53、KRT8、CLDN4 mRNA表达水平明显上调（P<0.05）,p53、KRT8、CLDN4、N-CAD、α-SMA蛋白表达水平明显增多（P<0.05）,p53、p21、KRT8荧光表达水平明显增多（P<0.01）；与MOD组相比，JHF组和PFT-α组G1期百分比明显升高（P<0.05）,G2期百分比明显降低（P<0.01）;IL??6、IL??8、p21、p53、KRT8、CLDN4 mRNA表达水平明显下调（P<0.05）,p53、KRT8、CLDN4、N-CAD、α-SMA蛋白表达水平明显减少（P<0.05）,p53、p21、KRT8荧光表达水平明显减少（P<0.01），各组KRT8荧光与p21荧光的皮尔森系数>0.5。结论：金水缓纤方可以改善BLM诱导的HPAEPIC细胞肺纤维化，其机制可能与抑制p53-KRT8通路，减轻HPAEPIC细胞衰老和分化障碍有关。

关键词

肺纤维化 / 衰老 / 金水缓纤方 / KRT8 / Ⅱ型肺泡上皮细胞