生物信息学视角下SPHK2于胃癌中的表达剖析及其潜在诊疗价值探究

The expression analysis of SPHK2 in gastric cancer and its potential diagnostic and therapeutic value from the perspective of bioinformatics

摘要

目的 利用生物信息学和细胞实验探讨鞘氨醇激酶2（sphingosine kinase 2，SPHK2）在胃癌（gastric cancer，GC）中的表达及其与预后的联系，并评估其潜在诊疗价值。 方法 通过HPA、GEPIA数据库分析SPHK2在GC中的表达，并检验其与MKI67（Ki‑67）表达的相关性；利用Kaplan‑Meier Plotter数据库评估SPHK2表达与GC患者预后的关系；借助UCSC和TIMER2.0数据库探讨SPHK2与肿瘤微环境的联系；基于Sangerbox数据库研究SPHK2表达与免疫治疗的关联；使用cBioPortal、Metascape数据库分析SPHK2基因突变及富集情况；采用免疫组织化学染色技术检测SPHK2表达与GC患者临床病理特征之间的关联性；在HGC‑27细胞系中利用慢病毒敲低SPHK2，使用Western blot检测各蛋白表达，结合CCK‑8、克隆形成实验探讨细胞增殖，并通过细胞划痕和Transwell小室实验评估细胞的迁移能力。 结果 SPHK2在GC组织中明显上调（P<0.05），与MKI67表达成正相关（r=0.21，P=1.1×10^-5）；生存分析显示，GC中SPHK2高表达与较差的总生存期（P=0.00 024）和进展后生存期（P=1.1×10^-6）相关；TIMER2.0和Sangerbox数据库分析表明SPHK2表达与B细胞、CD4⁺T细胞相关（P<0.05），并可作为评估免疫检查点抑制剂在GC患者中治疗成效的指标；GO和KEGG富集分析显示SPHK2可能参与多条GC发生相关的通路；细胞实验表明，对照组（SPHK2‑nc）的增殖和迁移能力优于实验组（SPHK2‑sh），说明SPHK2对GC细胞的增殖与迁移有明显影响（P<0.05）。 结论 SPHK2在GC患者中呈现高表达，影响细胞增殖与迁移能力，并与肿瘤微环境及免疫检查点基因密切相关，可以作为评估GC诊断、预后及免疫治疗效果的潜在指标。

Abstract

Objective To investigate the expression of sphingosine kinase 2 （SPHK2） in gastric cancer （GC） and its relationship with prognosis by bioinformatics and cell experiments， and to evaluate its potential diagnostic and therapeutic value. Methods The expression of SPHK2 in GC was analyzed by HPA and GEPIA databases， and its correlation with MKI67 （Ki‑67） expression was tested. Kaplan‑Meier Plotter database was used to evaluate the relationship between SPHK2 expression and prognosis of GC patients. The relationship between SPHK2 and tumor microenvironment was explored by UCSC and TIMER2.0 database. The association of SPHK2 expression with immunotherapy was studied based on the Sangerbox database. The cBioPortal and Metascape databases were used to analyze the mutation and enrichment of SPHK2 gene. Immunohistochemical staining （IHC） was used to detect the correlation between SPHK2 expression and clinicopathological features of GC patients. SPHK2 was knocked down by lentivirus in HGC‑27 cell line. Western blot was used to detect the expression of each protein. CCK‑8 and clone formation experiments were used to investigate cell proliferation. Cell scratch and Transwell chamber experiments were used to evaluate cell migration. Results The expression of SPHK2 was significantly up‑regulated in GC tissues （P<0.05）， which was positively correlated with the expression of MKI67 （r=0.21，P=1.1×10^-5）. Survival analysis showed that high expression of SPHK2 in GC was associated with poor overall survival （P=0.000 24） and post‑progressive survival （P=1.1×10^-6）. TIMER2.0 and Sangerbox database analysis showed that SPHK2 expression was associated with B cells and CD4⁺ T cells （P<0.05）， and could be used as an indicator to evaluate the efficacy of immune checkpoint inhibitors in patients with GC. GO and KEGG enrichment analysis showed that SPHK2 may be involved in multiple GC‑related pathways. Cell experiments showed that the proliferation and migration of the control group （SPHK2‑nc） were better than those of the experimental group （SPHK2‑sh）， indicating that SPHK2 had a significant effect on the proliferation and migration of GC cells （P<0.05）. Conclusions SPHK2 is highly expressed in GC patients， affects cell proliferation and migration， and is closely related to tumor microenvironment and immune checkpoint genes. It can be used as a potential index to evaluate the diagnosis， prognosis and immunotherapy effect of GC.

Graphical abstract

关键词

胃癌 / SPHK2 / 生物信息学 / 预后 / 细胞增殖与迁移 / 免疫治疗

Key words

Gastric cancer / SPHK2 / Bioinformatics / Prognosis / Cell proliferation and migration / Immunotherapy

胃癌（gastric cancer，GC）是全球常见的恶性肿瘤之一，对人类的生命和健康构成了严重威胁^［1］。此病来源于胃黏膜上皮组织，恶性程度高。其早期症状通常较为隐匿，致使多数患者就诊时已达中晚期，增加治疗难度，使预后普遍较差。根据国家癌症中心报告，我国GC的发病人数位居第5位，死亡人数位居第3位，呈现出男性患者数量多于女性、农村地区的病例高于城市的特点，并且肿瘤的发生正在趋于年轻化^［2］。GC的诊断依赖于内镜活检、内镜超声检查（endoscopic ultrasonography，EUS）、消化道造影、微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）等技术。其中，内镜活检是诊断GC的金标准^［3］。免疫检查点阻断疗法作为一种新兴的肿瘤免疫治疗手段^［4］，明显提升多种肿瘤患者的治疗成效，但需要识别可靠的生物标志物以筛选敏感患者^［5］。因此，面对GC存在诊断延迟、预后欠佳以及免疫治疗疗效不明显的问题^［6，7］，亟需寻找适宜的基因靶点和肿瘤标志物。

鞘氨醇激酶（sphingosine kinase，SPHK）是1种催化鞘氨醇磷酸化，生成鞘氨醇‑1‑磷酸（sphingosine‑1‑phosphate，S1P）的脂质激酶。SPHK在人体中主要有2种亚型：鞘氨醇激酶1（sphingosine kinase 1，SPHK1）和鞘氨醇激酶2（sphingosine kinase 2，SPHK2），其中SPHK2/SIP通路定位于细胞核、内质网和线粒体等多个细胞器上，参与促进凋亡、端粒维持、调节转录等许多生物过程，并与癌症等疾病的病理机制密切相关^［8，9］。研究表明，SPHK2在肿瘤的发生过程中具有直接促进作用^［10］，如促进胆管癌细胞的生长增殖^［11］、卵巢癌细胞的迁移侵袭^［12］等。但SPHK2在GC发生与进展中的作用尚不明确，因此需要对该蛋白分子进行进一步的剖析和探索。

随着TCGA癌症基因组图谱等数据库的持续优化，通过生物信息学手段分析SPHK2在GC中的表达，探讨其与生存预后、肿瘤微环境及免疫检查点之间的潜在联系，剖析其在GC增殖和迁移中的作用，旨在为GC的诊断、免疫治疗和生存预后预测提供有价值的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床数据

本研究回顾性收集蚌埠医科大学第一附属医院在2023年7~12月内诊治的胃癌患者的临床病理数据。纳入标准：（1）年龄18~80周岁；（2）手术方式为根治性手术；（3）术前胃镜活检病理及术后标本病理为胃腺癌；（4）标本被妥善保存，未受任何损坏。排除标准：（1）术前接受过新辅助治疗的患者；（2）罹患其他脏器的恶性肿瘤或已发生转移的患者；（3）患有严重心肺功能障碍、精神疾病或认知障碍的患者；（4）临床资料不完整者。经过筛选，本研究选取了53例满足上述标准的标本。本研究获得蚌埠医科大学伦理委员会的批准［伦理批号：第（2023）311，（2023）405号］。

1.1.2 主要试剂

HGC‑27细胞系、RPMI‑1640培养基、胰酶、胎牛血清（武汉普诺赛生命科技）；总RNA提取试剂盒、反转录及定量聚合酶链反应（qPCR）试剂盒（Novoprotein）；敲低基因的慢病毒（上海百易基因科技）；β‑actin和SPHK2抗体（武汉三鹰生物）。

1.2 方法

1.2.1 公共数据库分析

使用HPA（https：//www.proteinatlas.org）数据库定位并分析SPHK2基因在相关免疫细胞中的表达，利用GEPIA（http：//gepia.cancer-pku.cn）数据库分析SPHK2和MKI67在GC中的表达，通过Kaplan‑Meier Plotter（https//： kmplot.com）数据库进行生存预后在线分析，基于TIMER2.0（http：//timer.cistrome.org）数据库探究SPHK2与肿瘤微环境之间的潜在关联，并在Sangerbox（http：//www.sangerbox.com）数据库中分析了SPHK2表达与肿瘤免疫治疗之间的关系。此外，通过访问cBioPortal（https：//www.cbioportal.org）数据库分析基因突变情况，并下载SPHK2在GC中共同表达的潜在靶基因数据，利用Metascape（https：//metascape.org）在线工具进行GO和KEGG富集，使用微生信平台（https：//www.bioinformatics.com.cn）进一步探讨分析结果。

1.2.2 细胞培养

人GC细胞系HGC‑27在RPMI‑1640、10% FBS、1% PS的培养基中，于37 ℃、5% CO₂的恒温培养箱中培养。

1.2.3 qPCR

收集培养后的HGC‑27细胞，提取总RNA，进行质量和浓度检测后反转录为cDNA，再按照qPCR试剂盒操作方法，以合成的cDNA为模板进行PCR扩增（表1），最后使用2^-ΔΔCt计算SPHK2 mRNA表达水平。

1.2.4 Western blot

对细胞进行裂解、离心后提取蛋白，并利用BCA法进行定量分析。取适量的蛋白样本电泳分离，结束后将蛋白凝胶转膜至PVDF膜上，用5%脱脂牛奶在室温下封闭90 min。将膜置于一抗溶液中（SPHK2∶1∶1 000；β‑actin∶1∶5 000），并在4 ℃条件下进行孵育过夜。次日用TBST缓冲液洗涤膜3次，每次15 min，然后将膜放入稀释的二抗溶液中，于室温下孵育90 min，再次洗膜后使用化学试剂进行曝光及显影。

1.2.5 CCK‑8及克隆形成实验

CCK‑8：以2×10³/孔的细胞密度，将细胞接种于96孔板中，并置于37 ℃、5% CO₂的培养箱中培养。培养周期设定为48 h，每12 小时为一节点向每孔加入10 μL的CCK‑8试剂孵育，孵育结束后使用酶标仪检测450 nm处的吸光度。 克隆形成实验：将细胞以每孔500个细胞接种于6孔板中，于37 ℃、5% CO₂的培养箱中培养14 d，每隔3 d更换新培养基，当出现肉眼可见的细胞集落时，PBS洗涤2遍，用4%的多聚甲醛2 mL固定细胞15 min，加入适量结晶紫染色液染色15 min，待细胞集落着色用相机拍照记录。

1.2.6 细胞划痕技术

把细胞以适当密度（1×10⁶/孔）接种于6孔板中，培养至细胞完全贴壁且融合度达到90%~100%时，用无菌枪头在细胞单层上垂直于孔板底面均匀划线，置于培养基中继续培养。分别于0、24 h在相同放大倍数和相同位置下观察并拍摄图像，最后使用ImageJ软件测量划痕宽度或迁移距离，计算细胞迁移率。

1.2.7 Transwell小室实验

将适量细胞悬液以5×10⁴/100 μL加入 Transwell小室上室，下室加入0.6 mL的完全培养基作为趋化因子。 于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养24 h后取出，用棉签擦去上室细胞，下室用4%多聚甲醛固定30 min，PBS洗涤后加入结晶紫染色10 min，完成后在显微镜下观察并计数。

1.2.8 免疫组织化学

参照张浩等^［13］的染色评分过程，对临床53例GC组织（肿瘤中心区域，避开坏死和出血部分，病理学结果为胃腺癌的组织）及其对应的正常组织（距肿瘤边缘≥5 cm且无病理学异常的组织）按照标准程序进行处理。其操作涵盖固定、脱水、包埋、制片及染色，经一抗和二抗孵育后进行DAB染色，随后显色并采集图片评分。所有切片由两位主治及以上职称的病理科医师独立进行盲审评分。

1.3 统计学处理

生物信息学数据通过调用数据库预设的统计方法进行相关分析，其余数据则利用SPSS26.0、GraphPad Prism10.0和ImageJ等软件进行统计分析。采用了t检验、χ²检验及Wilcoxon秩和检验等分析方法，检验水准α=0.05。P<0.05为差异具有统计学意义。各实验设定3次重复。

2 结果

2.1 SPHK2在细胞中的定位

通过对HPA数据库的深入检索与解析，发现SPHK2在细胞模型中主要定位于胞核内（图1A）。进一步采用免疫荧光技术进行检测后，结果显示SPHK2在人体细胞的胞核中呈现出高表达的特征（图1B）。

2.2 SPHK2存在于多种免疫细胞中

通过免疫细胞层面的分析可知，SPHK2在嗜碱粒细胞、B细胞及单核细胞中表达水平较高，而在嗜酸粒细胞和中性粒细胞中表达水平较低（图2A）。此外，正常胃组织中，SPHK2在内皮细胞、巨噬细胞和浆细胞等多种核心细胞中也广泛表达（图2B）。

2.3 SPHK2在多种组织中高表达

基于HPA数据库，可以发现SPHK2在40种人体正常组织中，十二指肠的蛋白表达量最高，而在胃组织中位居第8位（图3A、B）。在TIMER 2.0数据库中检索分析，SPHK2基因在19种恶性肿瘤中呈现高表达，包括膀胱尿路上皮癌（BLCA）、结肠癌（COAD）、前列腺癌（PRAD）、直肠腺癌（READ）、胃癌（STAD）（P<0.05）（图3C）。

2.4 SPHK2在GC组织中的表达及预后分析

MKI67（亦称Ki‑67）是一种细胞周期蛋白，对指导GC患者的治疗和预后评估具有关键作用^［14］。GEPIA数据库分析显示，SPHK2与MKI67在GC组织中表达水平明显高于正常组织（P<0.05，图4A、B），且相关性分析表明，GC组织中SPHK2和MKI67的表达呈正相关（r=0.21，P=1.1×10^-5，图4C）。据此推测，GC患者体内SPHK2的高水平表达或许与其预后不佳存在一定的关联性。借助Kaplan‑Meier Plotter数据库分析胃癌患者的5年生存预后，结果显示，SPHK2高表达预示总生存期较短（P=0.000 24）（图4D），且进展后生存期更差（P=1.1×10^-6）（图4E）。

2.5 SPHK2的基因突变情况

利用cBioPortal癌症基因组学数据库分析SPHK2在GC不同组织学类型中的突变情况，结果显示黏液性胃腺癌的突变频率较高，约为4.76%（图5A）。此外，在SPHK2基因中识别出8个突变位点（包括5个错义突变和3个截断突变，图5B），这些突变可能会在蛋白质编码过程中影响氨基酸的改变，进而影响其功能并导致疾病的发生。

2.6 肿瘤免疫治疗与SPHK2表达的相关性

肿瘤免疫治疗与肿瘤干性指数（TSI）、肿瘤突变负荷（TMB）、微卫星不稳定性（MSI）和免疫检查点（ICP）等密切相关。TSI是反映肿瘤细胞和干细胞相似程度的指标，其中mDNAsi反映干细胞的表观遗传特征，mRNAsi则反映其基因表达特征；TMB是评估肿瘤免疫原性的重要指标，可用于预测免疫检查点抑制剂（ICIs）的疗效^［15］；MSI表征肿瘤基因组的稳定状态，高微卫星不稳定性（MSI‑H）往往意味着肿瘤细胞能产生更多新抗原，进而影响ICIs的疗效^［16］。ICP在维持免疫稳态和预防自身免疫中发挥重要调节作用，其抑制剂在多种肿瘤的治疗中存在着一定的潜力^{［17，18］}。

为了探寻SPHK2表达对GC患者免疫治疗的影响，利用SangerBox数据库对TSI、TMB及MSI的相关性进行了分析。结果显示，SPHK2在GC中的表达与mDNAsi和mRNAsi呈正相关（P<0.05）（图6A、B），与TMB呈负相关（P<0.05）（图6C），且与MSI无明显相关（P>0.05）（图6D）。据此分析结果提示，SPHK2表达与ICIs治疗敏感性有一定的相关性。进一步分析SPHK2与ICP基因之间的相关性显示，SPHK2在GC中与BTLA、LAG3、CTLA4等多个ICP基因明显相关（P<0.05）（图6E）。故而可表明，SPHK2可充任评估ICIs在GC患者中治疗成效的指标。

2.7 SPHK2与肿瘤微环境和免疫浸润水平的相关性

从UCSC数据库下载了标准化胃癌数据集，利用ESTIMATE算法对基质分数（Stromal Score）、免疫分数（Immune Score）、估计分数（ESTIMATE Score）进行评分，结果显示SPHK2表达与这些评分呈负相关（r<0，P<0.05）（图7A~C）。在TIMER2.0数据库中，SPHK2在GC免疫微环境中的表达水平与B细胞和CD4⁺T细胞呈正相关（r>0，P<0.05），但与CD8⁺T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞无确切关系（P>0.05）（图7D）。

2.8 SPHK2在GC中的通路富集

据此研究的目的，为深入了解基因在GC中的生物学过程，从cBioPortal数据库获取共表达的潜在靶基因，并利用Metascape在线工具进行GO和KEGG通路富集。GO富集分析中，着重分析生物过程（BP）、细胞组成（CC）和分子功能（MF）3大维度，识别出泛素依赖的蛋白质分解代谢过程（ubiquitin‑dependent protein catabolic process）、泛素连接酶复合体（ubiquitin ligase complex）、激酶活性（kinase activity）等与癌症信号通路相关的富集项（P<0.05）（图8A~C）。KEGG通路富集分析表明，SPHK2共表达的潜在靶基因明显集中到与GC发生、发展相关的通路，包括mRNA监视通路（mRNA surveillance pathway）、AMPK信号通路（AMPK signaling pathway）和Apelin信号通路（Apelin signaling pathway）等相关（P<0.05，图8D）。

2.9 SPHK2对HGC‑27细胞增殖、迁移的影响

为探讨SPHK2对GC细胞生长的影响，使用慢病毒对HGC‑27细胞系进行基因敲低，并通过Western blot和qPCR实验验证敲低结果（P<0.05，图9A、B）。在SPHK2基因被敲低后，CCK‑8、克隆形成实验结果显示HGC‑27细胞增殖活性和能力明显下降（P<0.05，图9C、D）。细胞划痕实验显示，SPHK2敲低处理后，HGC‑27细胞的迁移速度明显低于对照组（P<0.05，图9E）。此外，Transwell小室实验结果进一步表明，SPHK2基因的敲低明显降低了HGC‑27细胞的迁移能力（P<0.05，图9F）。

2.10 SPHK2在GC组织中的表达情况

根据组织标本评分，SPHK2在GC组织中的表达可分为高表达和低表达2组（得分≥4为高表达，<4为低表达）。利用SPSS26.0进行数据分析，结果显示与患者性别、年龄和肿瘤部位在SPHK2的高低表达中差异无统计学意义（P>0.05），但在肿瘤大小、病理分期、T分期和N分期方面差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

免疫组化（IHC）染色结果显示，SPHK2在GC组织中的染色强度明显高于正常组织（图10A、B）。数据分析表明，GC组织的染色评分明显高于正常组织（P<0.001）（图10C），且随着病理分期、T分期、N分期的升高，染色评分逐步增强（P<0.01）（图10D~F）。对GC患者的临床病理特征深入分析显示，SPHK2在GC组织中的表达水平明显升高，提示其可能与GC的进展存在某种关联。

3 讨论

GC是一种起源于胃上皮组织的恶性肿瘤，受到环境、饮食习惯、遗传因素等多种复杂条件的共同影响。在发病之初，患者通常缺乏典型的临床症状，这导致大多数患者在初步诊断时已达到进展期^［19］。全身化疗、外科手术、免疫治疗和靶向治疗等多学科诊疗是治疗GC的关键^［6］，但对于部分GC患者，仍缺乏相应的早期诊断及免疫治疗的标志物。目前在关于SPHK2与肿瘤关系的相关报道中提示SPHK2能够催化S1P的生成，通过减少神经酰胺的积聚、下调P53基因，促进相关成纤维细胞的活化，进而产生促肿瘤因子^［9，20］。研究还发现，SPHK2通过介导脂肪细胞、激活内皮细胞，为卵巢癌细胞的生长提供营养和氧气，并诱导卵巢癌细胞增殖^［21］。在肝细胞癌的相关研究中，SPHK2/S1P通过介导NF‑κB和STAT3的活化，在靶向药瑞戈非尼耐药中发挥重要的调控作用^［22］。SPHK2抑制剂与5‑FU联合能有效抑制骨髓来源的抑制细胞，增加肿瘤微环境中CD4⁺、CD8⁺T细胞的浸润，降低肿瘤负担，对结直肠癌有治疗作用^［23］。此外，SPHK2在肺动脉高压、脑缺血性疾病和神经退行性疾病等发生机制中也有一定的影响作用^{［24，25］}。因此，对SPHK2在GC中的发生、发展机制的探究具有一定的临床诊疗意义，为后续的相关研究提供了基础和思考方向。

本研究借助GEPIA和Kaplan‑Meier Plotter数据库，对SPHK2在GC中的表达和相关预后情况进行了分析，发现SPHK2在GC中的表达明显上调，且SPHK2 高表达与GC患者较差的总生存期以及进展后生存期紧密相连。本研究通过IHC和Western blot技术检测了GC及其相关组织中的SPHK2表达水平，结果与生物信息学分析相符。随后，本研究通过TCGA、TIMER2.0、GEPIA等数据库探究了SPHK2在泛癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖因子Ki‑67的相关性，结果显示SPHK2在结肠癌、直肠腺癌、GC等多个恶性肿瘤中高表达，并在GC中与Ki‑67呈正相关。肿瘤微环境中的免疫细胞和基质细胞在肿瘤起始阶段发挥关键作用，肿瘤相关成纤维细胞对肿瘤的发生、发展有重要影响^{［26‑28］}，因此通过TIMER2.0‑Immune、UCSC数据库分析，结果得知SPHK2在GC中与基质分数、免疫分数、估计分数等呈负相关，而与B细胞和CD4⁺T细胞呈正相关，提示其可能具有调节肿瘤微环境及影响免疫系统的潜在作用。免疫治疗是当前肿瘤治疗的热点，如免疫抑制剂PD‑1/PD‑L1与多种免疫检查点受体抗体联合应用可明显提高抗肿瘤疗效，并且与化疗、放疗联用时可以延长肿瘤患者的生存期^{［17，18］}_。研究显示，TSI、TMB、MSI可以作为预测肿瘤对ICIs反应的关键生物标志物，在抗PD‑1/PD‑L1免疫疗法疗效预测中具有重要价值^{［29，30］}，而CTLA4、LAG3等免疫检查点基因标记物在GC进展中可能具有重要指示作用^{［31，32］}。通过SangerBox数据库的分析结果可知，SPHK2在GC组织中的表达与TSI、TMB及多个免疫检查点基因明显相关，这表明SPHK2基因有望成为GC患者的潜在免疫治疗靶点。SPHK2作为一种重要的酶类分子，在富集通路分析发现与多种GC发生、发展的通路相关，如AMPK signaling pathway、mRNA surveillance pathway、Apelin signaling pathway等。Ghrelin（生长激素释放肽）可以通过激活AMPK信号通路影响胃癌的进展^［33］，且AMPK可以作为GC新辅助化疗的分子靶点^［34］。此外，mRNA监控系统功能失常可能引发蛋白质合成错误，Apelin信号通路通过诱导PI3K / Akt的激活，上调β‑catenin、c‑myc和cyclin D1，可以促进肿瘤细胞的增殖、迁移和葡萄糖摄取^［35］，这两种通路都可能与GC的发生、发展相关。相关文献已经证实SPHK2与肿瘤的增殖、迁移有一定的关联，因此通过细胞实验进一步验证其在GC中的生物学功能，显示敲低SPHK2后HGC‑27细胞的增殖和迁移能力明显下降，提示SPHK2可能是促进GC发生、发展的一个重要因子。

综合研究表明，SPHK2在GC的发生、发展中具有明显影响，并与肿瘤微环境及免疫检查点基因密切相关，可能成为评估GC诊断、预后及免疫治疗效果的预测标志物，为新药物或治疗方法的研发提供了新视角。然而，本研究存在一定的局限性，例如未对临床数据进一步完善和深入分析，未探讨在GC中的具体作用机制，也未构建GC移植瘤模型以验证SPHK2对GC细胞表型和转移作用的影响。

作者贡献度说明：

王睿朋：文献查找、生信分析、实验设计及实施、数据收集及整理、论文撰写；李婷婷：文献查找、生信分析、数据收集及整理；管佳佳：数据整理、文章审阅及修改；凌潜龙、纪凯、满文江、常博达：实验设计及实施；朱冰：论文撰写指导。

所有作者声明不存在利益冲突关系。

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基金资助

安徽省高等学校自然科学研究项目(KJ2021ZD0090)

蚌埠医学院研究生科研创新项目(Byycx22090)

安徽省2023年度新时代育人省级质量工程项目(2023xscx125)