miR-193b-5p靶向CD44v6调控宫颈癌细胞侵袭、迁移以及上皮-间质转化的机制研究

摘要

目的：探究微小RNA-193b-5p(miR-193b-5p)对宫颈癌的影响及作用机制。方法：收集38例宫颈癌患者手术切除的宫颈癌肿瘤组织及同期38例来源于我院因良性病变切除全子宫患者的正常宫颈组织，RT-qPCR检测两种组织中miR-193b-5p表达水平；将SiHa细胞分为对照组、mimics NC组、miR-193b-5p mimics组、inhibitorsNC组、miR-193b-5pinhibitors组，进行相应转染后，RT-qPCR检测各组细胞中miR-193b-5p表达水平，CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室法分别检测各组SiHa细胞的增殖活性、迁移、侵袭，细胞免疫荧光染色和Western Blot检测各组SiHa细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）等上皮-间质转化（EMT）相关蛋白表达，生物信息学结合双荧光素酶报告基因实验预测和验证miR-193b-5p与白细胞分化抗原44号拼接变异体v6(CD44v6)的靶向调控关系。结果：宫颈癌组织中miR-193b-5p相对表达量显著低于与正常宫颈组织（P<0.05）。与对照组、mimics NC组比较，miR-193b-5p mimics组SiHa细胞中miR-193b-5p相对表达量显著上调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著降低（P<0.05），细胞侵袭数目显著减少（P<0.05）,E-cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05）；而与对照组、inhibitors NC组比较，miR-193b-5p inhibitors组SiHa细胞中miR-193b-5p相对表达量显著下调（P<0.05），细胞增殖活性、细胞划痕愈合率显著升高（P<0.05），细胞侵袭数目显著增加（P<0.05）,E-cadherin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著减少（P<0.05）,N-cadherin、Vimentin荧光染色强度和蛋白相对表达量显著增加（P<0.05）。miR-193b-5p与CD44v6的3′-非翻译区（3′-UTR）存在结合位点，且与mimics NC组比较，将miR-193b-5p mimics转染至SiHa细胞中显著抑制了CD44v6野生型（WT）的相对荧光素酶活性（P<0.05）。结论：miR-193b-5p在人宫颈癌肿瘤组织中表达降低，提高其表达能够抑制细胞增殖活性、迁移、侵袭及EMT等恶性行为，其分子机制可能与靶向抑制CD44v6表达有关。

关键词

宫颈癌 / miR-193b-5p / CD44v6 / 侵袭 / 迁移 / 上皮-间质转化