miR-126a-3p靶向Bcl-6介导凋亡途径调控脓毒症Th1/Th2细胞平衡

李苗苗; 王洁; 齐雅囡; 王婷; 王德伟; 刘成

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20250314.005

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (11) : 840 -848. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250314.005

miR-126a-3p靶向Bcl-6介导凋亡途径调控脓毒症Th1/Th2细胞平衡

李苗苗, 王洁, 齐雅囡, 王婷, 王德伟, 刘成

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摘要

目的：探讨miR-126a-3p与B细胞淋巴瘤6(Bcl-6)的关系以及其对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及T细胞分化的影响和机制。方法：利用miRWalk数据库预测miR-126a-3p的靶基因，进一步利用Cytoscape软件筛选出核心靶基因。然后通过腹腔注射0.9%氯化钠溶液（NS）和脂多糖（LPS;20 mg/kg）将小鼠随机分为正常对照组（sham组）、脓毒症组（LPS组）、LPS+miR-126a-3p mimic组（miR-126 mimic组）、LPS+miR-126a-3p inhibitor组（miR-126 inhibitor组）。48 h后从小鼠尾静脉采集外周血，通过密度梯度离心法提取T淋巴细胞，然后将miR-126a-3p模拟物（mimic）和抑制剂（inhibitor）转染至miR-126 mimic组和miR-126 inhibitor组脓毒症T淋巴细胞中。采用聚合酶链反应及蛋白质印记实验检测T细胞内Bcl-6 mRNA和蛋白水平，Annexin V-FITC/PI双染法检测T淋巴细胞凋亡，流式细胞术检测辅助性T细胞（Th）1、Th2比例，最后通过GraphPad Prism 9.0软件对数据进行统计分析。结果：miRWalk数据库检索获得5 930个miR-126a-3p的预测靶点，其中Bcl-6是miR-126a-3p的核心靶点之一。Bcl-6的表达水平与miR-126a-3p的表达水平呈正相关，两者具有靶向调控关系。且与sham组相比，LPS组Bcl-6 mRNA及蛋白表达减少，T淋巴细胞凋亡增多，T细胞向Th1分化增多，向Th2分化减少，Th1/Th2比值增加，差异均具有统计学意义（P<0.001）；与LPS组相比，增强（miR-126 mimic组）或抑制（miR-126 inhibitor组）miR-126a-3p表达后，Bcl-6 mRNA和蛋白表达、T细胞凋亡及Th1和Th2细胞比例均表现出相应的增加或减少，差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论：脓毒症小鼠T淋巴细胞内抗凋亡蛋白Bcl-6表达异常，其表达水平受miR-126a-3p的靶向调控，从而影响T淋巴细胞的凋亡及Th1/Th2细胞分化，进而调节脓毒症免疫状态，该研究可以为脓毒症患者的治疗提供新的治疗靶点和理论依据。