肝豆灵通过调控LncRNA H19促进胆汁排铜改善Wilson病肝纤维化

摘要

目的：观察肝豆灵（Gandouling,GDL）对铜负荷Wilson病大鼠肝组织和血清外泌体长链非编码RNA H19（long non-coding RNA H19, LncRNA H19）及胆汁淤积的影响，探讨GDL改善Wilson病肝纤维化的作用机制。方法：将60只SD雄性大鼠随机分为正常（Control）组、模型（Model）组、GDL低剂量（GDL-L）组、GDL中剂量（GDL-M）组、GDL高剂量（GDL-H）组、青霉胺（penicillamine,PCA）组，每组10只。通过喂养五水合硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）构建铜负荷Wilson病肝纤维化模型，造模过程中同时给药。GDL各治疗组及PCA组灌胃相应剂量药物，Control组和Model组灌胃等体积蒸馏水，连续30 d。H&E和Masson染色观察肝脏病理学改变；ELISA检测胆汁淤积指标γ-谷氨酰转移酶（γ-glutamyl transferase,GGT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）、总胆汁酸（total bile acids,TBA）和肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）水平；原子吸收分光光度计测定胆汁铜含量；RT-qPCR检测LncRNA H19、胆管反应指标细胞角蛋白7（cytokeratin7,CK7）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）基因表达；Western blot观察CK7、CK19蛋白表达。结果：与Control组相比，Model组肝组织病理形态显示细胞核边界不清伴有裂解、坏死，肝组织中央静脉及胆管周围出现明显的胶原沉积；ALT、AST、GGT、ALP、TBIL、TBA、胆汁铜水平明显升高（P<0.01）;LncRNA H19、CK7、CK19基因表达水平明显升高（P<0.01）;CK7、CK19蛋白水平明显升高（P<0.01）。经GDL和PCA干预后，肝组织纤维化程度明显改善；ALT、AST、GGT、ALP、TBIL、TBA、胆汁铜含量降低（GDL-L组ALT、TBIL、TBA除外）(P<0.01);LncRNA H19、CK7、CK19基因表达水平降低（P<0.01）;CK7、CK19蛋白水平降低（GDL-L组CK7除外）(P<0.05)。结论：GDL可能通过调控LncRNA H19的表达，促进胆汁排铜，改善铜负荷Wilson病大鼠肝纤维化。

关键词

肝豆灵 / 胆汁淤积 / 肝纤维化 / LncRNA H19 / Wilson病