半悬浮组织器官培养法提取原代大鼠脂肪间充质干细胞及其鉴定

唐元瑜; 池茗; 李柏霖; 林志美; 赖素玉; 马华根

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20250425.003

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (14) : 1049 -1055. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250425.003

半悬浮组织器官培养法提取原代大鼠脂肪间充质干细胞及其鉴定

唐元瑜, 池茗, 李柏霖, 林志美, 赖素玉, 马华根

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摘要

目的：采用“半悬浮组织器官培养法”提取原代大鼠脂肪间充质干细胞（AD-MSCs），为开展再生医学及组织损伤修复等研究提供理想的细胞来源。方法：无菌分离3周龄雄性SD大鼠双侧腹股沟和附睾处的脂肪垫，经消毒、漂洗、剪碎、0.1%Ⅱ型胶原酶消化30 min后，严格精准地控制低糖型DMEM完全培养液用量，进行“半悬浮”原代培养；当细胞生长融合度达到90%时进行传代扩增。通过细胞形态学观察、细胞表面标志物CD分子检测、成脂/成骨诱导分化实验鉴定所培养的目的细胞。结果：原代接种培养6～8 d后，贴壁生长的短梭形细胞铺满皿底，呈“成纤维样”漩涡式排列生长；细胞传代至第8代时其形态基本保持不变，未见明显“蝉翼样”变宽分化现象。第4代细胞表面标志物CD分子流式检测结果高表达CD90(97.3%)、CD73(96.7%)、CD44(84.1%)，低表达CD34(0.4%)、CD45(8.1%)、CD11b/c(3.6%)；诱导成脂、成骨分化实验均为阳性。结论：“半悬浮组织器官培养法”能够成功提取原代大鼠AD-MSCs。