基于TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路介导的巨噬细胞M1型极化探讨人参皂苷Rd抑制炎症治疗非酒精性脂肪性肝炎的机制研究

路瑶; 李婧; 王炳予; 袁星星

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20250515.004

海南医科大学学报 ›› 2025, Vol. 31 ›› Issue (18) : 1390 -1398. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250515.004

基于TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路介导的巨噬细胞M1型极化探讨人参皂苷Rd抑制炎症治疗非酒精性脂肪性肝炎的机制研究

路瑶, 李婧, 王炳予, 袁星星

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摘要

目的：本研究旨在阐明人参皂苷Rd对巨噬细胞TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路及M1型极化的影响，从而明确其治疗非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的分子机制；方法：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7随机分为空白组、模型组、人参皂苷Rd低剂量、高剂量组和抑制剂组。除空白组外，余下各组采用脂多糖诱导构建模型后给予相应的药物进行干预。分别采用酶联免疫吸附试验检测炎症因子（TNF-α、IL-6和IL-1β的）的含量；采用流式细胞术检测M1型巨噬细胞的百分比；采用蛋白印迹法和生化法检测TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路、自噬、ROS/p38/Nrf2通路中相关分子的表达；采用透射电镜检测巨噬细胞自噬水平的变化；结果：与模型组相比，人参皂苷Rd组中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量和M1型巨噬细胞的比例均显著降低，TLR4、TRAF6、iNOS和细胞核p65蛋白的表达显著下调，细胞质p65蛋白的表达显著上调，差异均具有统计学意义（P<0.01）。此外，人参皂苷Rd能显著增加巨噬细胞中SOD的活力和GSH的含量，降低MDA的含量，上调巨噬细胞中Beclin1蛋白的表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值，下调细胞质p62、Nrf2蛋白的表达和p-p38/p38的比值，下调p-p38/p38的比值和Nrf2蛋白的表达，与模型组比较差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论：人参皂苷Rd通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB/iNOS通路的激活从而抑制巨噬细胞M1型极化，从而改善NASH相关性炎症。此外，人参皂苷Rd还通过抑制ROS/P38/Nrf2轴促进自噬，从而抑制巨噬细胞M1型极化，增加抗炎效果。