miR-296-3p通过靶向ZBTB20抑制HSC-T6细胞的活化

周静; 李以恒; 李尹凡; 崔笑妍; 王梅梅; 张荣花; 刘志勇; 章广玲

doi:10.13210/j.cnki.jhmu.20250613.001

海南医科大学学报 ›› 2026, Vol. 32 ›› Issue (09) : 649 -660. DOI: 10.13210/j.cnki.jhmu.20250613.001

miR-296-3p通过靶向ZBTB20抑制HSC-T6细胞的活化

周静, 李以恒, 李尹凡, 崔笑妍, 王梅梅, 张荣花, 刘志勇, 章广玲

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摘要

目的：探讨miR-296-3p通过靶向锌指和BTB结构域蛋白20(BTB domain-containing protein 20,ZBTB20)对大鼠肝星状细胞HSC-T6活化的调控作用。方法：采用qRT-PCR检测经过转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激的大鼠肝星状细胞HSC-T6中纤维化标志物和miR-296-3p的表达水平；利用脂质体转染法将miR-296-3p mimic/inhibitor及各自的对照转染到HSC-T6细胞中，分组为：mimic NC组、miR-296-3p mimic组、inhibitor组和miR-296-3p inhibitor组，并且通过qRT-PCR、Western Blot、CCK-8、集落形成和Transwell实验检测转染miR-296-3p mimic/inhibitor后对HSC-T6细胞活化能力的影响；利用生物信息学方法预测miR-296-3p的候选靶基因，并用双荧光素酶基因报告实验进行验证；qRTPCR和Western blot实验检测miR-296-3p与候选靶基因ZBTB20之间的靶定关系；qRT-PCR、CCK-8及Transwell实验分析pcDNA3.1-ZBTB20能否逆转miR-296-3p+mimics对HSC-T6细胞活化能力的抑制作用。结果：HSC-T6细胞被TGF-β1刺激后进一步活化，并且活化的细胞中的miR-296-3p表达水平下调；miR-296-3p抑制HSC-T6的增殖、迁移，降低肝纤维化标志物I型胶原蛋白（Col1A1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平；通过生物信息学数据库预测以及双荧光素酶基因报告实验验证显示ZBTB20是miR-296-3p的功能靶基因，并且在HSC-T6中miR-296-3p负调控ZBTB20的表达；过表达ZBTB20可以部分逆转过表达miR-296-3p对HSC-T6活化的抑制作用。结论：miR-296-3p通过靶向抑制ZBTB20的表达从而抑制HSC-T6细胞的进一步活化。