CircADAMTS-6调控AECOPD细胞模型抗病毒固有免疫的机制研究

Research on the mechanism of circADAMTS‑6 regulating antiviral innate immunity in AECOPD cell model

摘要

目的 探讨环状RNA circADAMTS-6通过调控miR-1260b/IFNAR2轴对慢性阻塞性肺疾病急性加重（acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD）细胞模型抗病毒固有免疫防御反应的影响。 方法 （1）香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract，CSE）干预人支气管上皮细胞（BEAS-2B）建立COPD细胞模型，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2表达，免疫印迹（Western blot，WB）检测IFNAR2蛋白表达；（2）过表达circADAMTS-6的BEAS-2B经CSE+poly（dA∶dT）干预建立AECOPD细胞模型，检测抗病毒固有免疫通路ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化水平；（3）双荧光素酶报告基因检测circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2之间的关系；（4）BEAS-2B细胞分别转染miR-1260b激活剂+过表达IFNAR2质粒、或转染过表达IFNAR2质粒+小干扰circADAMTS-6，随后经CSE+poly（dA∶dT）干预，WB检测STAT1、STAT2磷酸化水平。 结果 （1）COPD细胞模型circADAMTS-6、IFNAR2表达降低，miR-1260b表达升高（P<0.05）；（2）过表达circADAMTS-6促进AECOPD细胞模型ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化（P<0.05）；（3）miR-1260b分别与circADAMTS-6及IFNAR2结合（P<0.05）；（4）过表达IFNAR2促进STAT1、STAT2磷酸化，联合过表达miR-1260b或沉默circADAMTS-6逆转IFNAR2过表达的促进作用（P<0.05）。 结论 circADAMTS-6可能通过抑制miR-1260b促进IFNAR2表达，激活STAT1/2介导的抗病毒免疫通路，增强AECOPD细胞模型的抗病毒免疫防御。

Abstract

Objective To explore the effect of circADAMTS-6 on antiviral innate immune response in cell model of acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease （AECOPD） via regulating miR-1260b/IFNAR2 axis. Methods （1） Cigarette smoke extract （CSE） was used to intervene in BEAS-2B cells to conduct a COPD cell model. The expressions of circADAMTS-6， miR-1260b and IFNAR2 were detected by real-time fluorescence quantitative PCR （qRT-PCR）， and the IFNAR2 protein expression was detected by Western blot （WB）. （2） After overexpression of circADAMTS-6， BEAS-2B cells were treated with CSE combined with viral analogue poly （dA∶dT） to establish an AECOPD cell model. The antiviral innate immune pathway molecules ISG15 and CXCL10 mRNA， as well as STAT1 and STAT2 proteins phosphorylation levels were detected； （3） The relationships among circADAMTS-6， miR-1260b and IFNAR2 were verified via dual-luciferase reporter gene； （4） After overexpression of IFNAR2 combined with overexpression of miR-1260b or silencing of circADAMTS-6， BEAS-2B cells were intervened by CSE plus poly （dA∶dT）. Western blots were used to detected the phosphorylation levels of STAT1 and STAT2 proteins. Results （1） The expressions of circADAMTS-6 and IFNAR2 in COPD cell models were decreased， while miR-1260b expression was increased（P<0.05）. （2） circADAMTS-6 overexpression promoted ISG15 and CXCL10 mRNA expressions and the STAT1 and STAT2 proteins phosphorylation in AECOPD cell models（P<0.05）.（3） miR-1260b interacted with circADAMTS-6 and IFNAR2（P<0.05）. （4） IFNAR2 overexpression promoted the STAT1 and STAT2 proteins phosphorylation. Combined overexpression of miR-1260b or silencing circADAMTS-6 reversed the promoting effect of IFNAR2 overexpression（P<0.05）. Conclusion circADAMTS-6 may play a protective role in AECOPD cell model via increasing the IFNAR2 expression by inhibiting miR-1260b， promoting the activation of STAT1/2-mediated antiviral immune pathway.

Graphical abstract

关键词

慢性阻塞性肺疾病急性加重 / 环状RNA ADAMTS-6 / 微小RNA 1260b / I型干扰素受体亚基2 / 抗病毒固有免疫

Key words

Acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease / CircADAMTS-6 / MiR-1260b / IFNAR2 / Antiviral innate immune response

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是全球人口死亡的主要原因之一。慢阻肺急性加重（acute exacerbation of COPD，AECOPD）使患者肺功能及生活质量下降，增加住院率和病死率，造成巨大经济和社会负担^［1-3］。呼吸道病毒感染是AECOPD的主要原因。气道上皮细胞是抵御呼吸道感染的第一道防线，识别病毒、产生Ⅰ型干扰素（type Ⅰ interferons，IFN-Ⅰ），IFN-Ⅰ与受体（IFN-Ⅰ receptor，IFNAR，由IFNAR1和IFNAR2组成）结合并促进信号转导及转录激活因子1/2（signal transducer and activator of transcription1/2，STAT1/2）磷酸化及IFN刺激基因（IFN-stimulated genes，ISGs）表达以抵御病毒^［4，5］。香烟烟雾（cigarette smoke，CS）是COPD的主要危险因素，抑制抗病毒固有免疫反应使其对病毒易感性增加^［6］，具体机制尚不明确。

环状RNA（Circular RNAs，circRNAs）由前体mRNA反向剪接形成，无5′帽结构和3′poly（A）结构，据报道circRNA与COPD发病机制相关^［7］，研究发现AECOPD患者血清circRNA0001859丰度降低，可能作为其预后标志物，但未涉及机制研究^［8］。circRNA也调节抗病毒防御反应，参与新型冠状病毒及甲型流感病毒等的免疫调控^［9，10］。研究报道具有凝血反应蛋白基序-6的崩解素和金属蛋白酶基因（a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motif-6 ADAMTS-6）产生的环状RNA circADAMTS-6（hsa_circ_0008667）通过miR-324-5p/PIK3R3对IL-1β刺激的软骨细胞发挥保护作用^［11］，但hsa_circ_0008667（即circADAMTS-6）在AECOPD中作用尚不明确。本研究通过香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract，CSE）联合poly（dA∶dT）干预BEAS-2B细胞构建AECOPD细胞模型，探索circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2在AECOPD抗病毒固有免疫中的作用，为AECOPD防治提供潜在生物靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞

人支气管上皮细胞（BEAS-2B，AW-CNH004）和人胚肾细胞（HEK-293T，AW-CNH086）购买于长沙艾碧维科技有限公司。

1.1.2 主要试剂

DMEM培养基、胎牛血清、胰酶（Gibco，美国），链青霉素、RIPA裂解液（索莱宝，北京），香烟（白沙牌，湖南长沙）。BCA蛋白浓度测定试剂盒、抗体稀释液（碧云天，中国）。5×蛋白上样缓冲液、蛋白分子量marker、HRP发光试剂、poly（dA∶dT）、Lipofectamine2000脂质体、TransZol、circRNA及mRNA逆转录和PCR试剂盒（赛默飞，美国），PCR引物（生工，上海）。microRNA逆转录及PCR试剂盒（康维世纪，江苏）。小干扰RNA和过表达质粒、双荧光素酶报告质粒circADAMTS-6-3ʹUTR-WT、circADAMTS-6-3ʹUTR-MUT及检测试剂盒、miR-1260b mimic、miR-NC（吉玛基因，上海）。IFNAR2-3ʹUTR-WT、IFNAR2-3ʹUTR-MUT双荧光素酶报告质粒（汉恒生物，上海）。circRNA原位杂交探针及试剂盒（lnc1100621，锐博，广州）。抗体GAPDH、STAT1、p‑STAT1、STAT2、IFNAR2（abcam，英国），抗体p-STAT2（CST，美国）及羊抗兔IgG（H+L）二抗（三鹰，武汉）。

1.1.3 主要仪器

分光光度仪、超净工作台、多功能酶标仪（赛默飞，美国），PVDF膜（Minipore，美国），制胶架、电泳槽、转膜仪（天能，上海），激光共聚焦显微镜系统（徕卡，德国），PCR仪及凝胶成像分析系统（赛默飞，美国）。

1.2 方法

1.2.1 制备CSE

充分燃烧一支去除过滤嘴的香烟（湖南中烟工业有限责任公司，白沙牌香烟，成分：焦油量10 mg，烟气烟碱量0.8 mg，烟气一氧化碳含量12 mg）产生的烟雾通过负压装置（LeyNow，广州）溶解于5 mL PBS。溶液经0.22 μm过滤嘴（Lida，美国）过滤，制备成无菌CSE经分光光度仪检测320 nm和540 nm波长的吸光值在0.9~1.2，定为100%CSE。提前30 min制备新鲜的100%CSE溶液，使用前稀释至所需的浓度。

1.2.2 细胞培养

BEAS-2B和293T细胞系培养于含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，培养条件为37 ℃、5%CO₂。按照实验目的将BEAS-2B、293T细胞接种于培养皿或培养板中，细胞生长至70%~80%，接受不同分组处理。后续使用3%CSE及2 µg/mL poly（dA∶dT）干预24 h进行AECOPD细胞体外实验。

1.2.3 细胞转染

用Lipofectamine 2000将对照小干扰RNA si-NC、si-circADAMTS-6、对照质粒Vector、过表达质粒pcDNA3.1IFNAR2（OE-IFNAR2）、pcDNA3.1circADAMTS-6（OE-circADAMTS-6）、miR-NC、miR-1260b mimic按转染说明书转染至BEAS-2B细胞，24 h后检测转染效率，再按照不同实验目的予以不同干预，24 h后收集细胞进行检测。寡核苷酸序列见表1。

1.2.4 荧光原位杂交实验

BEAS-2B接种至12孔板爬片，经4%多聚甲醛固定、0.1%TritonX-100渗透细胞膜、PBS洗涤。按照说明书进行预杂交，避光条件下分别加入Cy3标记的circADAMTS-6探针和18S探针杂交，37 ℃避光孵育过夜。次日予DAPI行核染色，使用激光共聚焦显微镜系统进行图像采集。

1.2.5 双荧光素酶报告基因检测

用Lipofectamine 2000将双荧光素酶报告基因质粒野生型或突变型分别与miR-1260bmimic或miR-NC共转染至293T细胞培养48 h，分组如下：miR-NC+circADAMTS-6-3ʹUTR-WT，miR-1260bmimic+circADAMTS-6-3ʹUTR-WT，miR-NC+circADAMTS-6-3ʹUTR-MUT，miR-1260bmimic+circADAMTS-6-3ʹUTR-MUT，miR-NC+IFNAR2-3ʹUTR-WT，miR-1260bmimic+IFNAR2-3ʹUTR-WT，miR-NC+IFNAR2-3ʹUTR-MUT，miR-1260bmimic+IFNAR2-3ʹUTR-MUT。48 h后冰上裂解细胞、离心收集上清，双荧光素酶报告基因试剂盒检测各组萤火虫荧光Firefly和海肾荧光Renilla活性，并计算比值。

1.2.6 定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）

BEAS-2B按照不同实验分组干预，TransZol提取总RNA并测浓度，按照说明书逆转录circRNA、miRNA及mRNA合成cDNA，circRNA、mRNA用GAPDH作参照，miRNA用U6作参照，按照qPCR试剂盒对上述cDNA进行荧光定量扩增，表2为引物序列。以2^-ΔΔCt值统计分析相关分子相对表达水平。

1.2.7 Western Blot

BEAS-2B接种于6孔板，按照不同分组干预，冰上裂解细胞30 min，收集于4 ℃，12 000×g离心20 min取上清，BCA检测蛋白浓度。蛋白与上样缓冲液按照4∶1混合充分，95 ℃金属浴10 min使蛋白充分变性。通过SDS-PAGE进行电泳分离蛋白，于转膜槽将蛋白转至PVDF膜，蛋白快速封闭液封闭30 min，与相应抗体IFNAR2（1∶1 000）、STAT1（1∶1 000）、p-STAT1（1∶1 000）、STAT2（1∶1 000）、p-STAT2（1∶1 000）、GAPDH（1∶1 000）在4 ℃孵育过夜。次日，TBST溶液充分漂洗3次，二抗（1∶5 000）室温孵育2 h，TBST漂洗3次。通过凝胶成像系统进行化学发光。

1.3 统计学处理

使用ImageJ检测WB条带灰度值、GraphPad Prism 9软件进行数据统计分析。本研究计量资料符合正态分布，以\overline{x}\pm s表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用Bonferroni's多重比较检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 circADAMTS-6、miR-1260b、IFNAR2在CSE干预的人支气管上皮细胞内表达情况

荧光原位杂交实验FISH显示circADAMTS-6定位于细胞质和细胞核（图1A）。PCR表明与空白组（NC）相比，CSE组circADAMTS-6、IFNAR2表达明显降低，而miR-1260b表达增加（P<0.05），见表3。WB结果表明CSE抑制IFNAR2蛋白表达（图1B、C）。

2.2 过表达circADAMTS-6削弱CSE对BEAS-2B细胞抗病毒免疫应答的抑制作用

使用poly（dA∶dT）模拟病毒感染，与Vector组相比，poly（dA∶dT）能明显诱导ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化，CSE明显抑制poly（dA∶dT）的诱导效应；而过表达circADAMTS-6明显增强poly（dA∶dT）诱导的ISG15和CXCL10 mRNA表达及STAT1、STAT2磷酸化，且明显削弱CSE对poly（dA：dT）的抑制作用（P<0.05），见表4、5及图2。

2.3 circADAMTS-6、IFNAR2和miR-1260b三者之间相互作用

生物信息学预测miR-1260b分别与circADAMTS-6、IFNAR2-3ʹUTR存在靶向关系（图3）。双荧光素酶实验结果显示，与miR-NC比较，miR-1260b mimc明显减弱circADAMTS-6-WT、IFNAR2-3ʹUTR-WT组荧光素酶活性，而对circADAMTS-6-MUT、IFNAR2-3ʹUTR-MUT组荧光素酶活性无明显影响（表6、7）。进一步说明circADAMTS-6与miR-1260b相互作用，miR-1260b与IFNAR2相互作用。

2.4 circADAMTS-6/miR-1260b靶向IFNAR2调控CSE对BEAS-2B细胞的抗病毒免疫应答

过表达IFNAR2明显减轻CSE对poly（dA∶dT）诱导的STAT1/STAT2磷酸化的抑制（图4，表8、9）；共转染miR-1260b mimic及OE-IFNAR2，明显削弱OE-IFNAR2对STAT1/STAT2磷酸化的促进作用（图4A，表8）。同样，共同转染si-circADAMTS-6及OE-IFNAR2，结果显示si-circADAMTS-6明显降低OE-IFNAR2对STAT1、STAT2磷酸化的促进作用（图4B，表9）。

3 讨论

AECOPD是慢阻肺的严重并发症，减少和预防AECOPD发生是慢阻肺治疗的重要目标之一^［12］。慢阻肺是异质性疾病，患者常不能识别急性加重的临床表现而耽误治疗，故预防、及时精准诊断AECOPD将使患者获益^［13］。呼吸道病毒感染是慢阻肺急性加重的主要诱因，COPD患者易合并病毒感染，而后者会加重气道炎症反应^［14］。研究发现香烟损害COPD患者气道抗病毒免疫反应而对病毒易感导致AECOPD发生，确切机制尚不明确^［15］。

circRNAs通过调控细胞凋亡、炎症、氧化应激等参与COPD发病^［16］。Zhou等^［17］报道了circFOXO3在CS暴露的肺组织和CSE处理的小鼠肺泡上皮细胞中过表达，敲减circFOXO3后CXCL1和IL-6表达减少，减轻炎症反应。研究发现AECOPD患者血清中circRNA表达失调，提示circRNA可能参与调控慢阻肺急性加重^［18］。本研究利用CSE干预支气管上皮细胞建立COPD细胞模型，发现CSE组circADAMTS-6表达降低。研究发现同样来源于ADAMTS-6亲本基因的hsa_circ_0072688参与COPD肺气肿发生^［19］。然而，尚无对circADAMTS-6在AECOPD中的报道。以往研究已证实circRNA是重要的抗病毒固有免疫防御调节因子，抑制或促进病毒感染^［20］。如hsa_circ_0004445通过与hnRNPC的结合明显抑制MERS-CoV的复制^［21］。本研究显示，过表达circADAMTS-6促进支气管上皮细胞对poly（dA∶dT）诱导的细胞因子CXCL10、ISG15 mRNA表达及STAT1/STAT2蛋白磷酸化水平，表明circADAMTS-6参与STAT1/2-ISGs抗病毒固有免疫通路调控，缓解CSE对固有免疫反应的抑制。

circRNAs作为miRNA分子海绵调节基因表达，如circBBS9通过靶向miR-30e-5p/ADAR加剧COPD的肺部炎症^［22］。circXPO1通过靶向miR-23b-3p抑制TGF-β活化激酶1/MAP3K7结合蛋白3（TAB3）的表达，而抑制circXPO1可缓解CS暴露的肺和CSE处理的肺泡上皮细胞的炎症和衰老^［23］。本研究FISH结果显示circADAMTS-6位于细胞质和细胞核中。生物信息学发现、双荧光素酶报告基因检测显示circADAMTS-6与miR-1260b结合，说明circADAMTS-6作为ceRNA结合miR-1260b。既往研究显示miR-1260b在COPD大鼠和NR8383细胞中高表达，并靶向抑制I κBα表达促进炎性细胞因子产生^［24］。本研究也表明miR-1260b在CSE干预的BEAS-2B细胞中表达升高，miR-1260b mimic加剧CSE对poly（dA：dT）诱导的抗病毒相关分子的抑制，说明miR-1260b在AECOPD抗病毒免疫防御受损中发挥作用。

Ⅰ型IFN受体由IFNAR1和IFNAR2亚基组成，IFNAR2与重症新冠肺炎患者临床预后相关^［25］。香烟通过下调IFNAR抑制IFN-I依赖性抗病毒免疫反应^［26］。与之前研究一致，本研究发现CSE抑制BEAS-2B细胞内IFNAR2 mRNA和蛋白表达，OE-IFNAR2促进STAT1/STAT2磷酸化，增强抗病毒固有免疫。Liu等^［27］发现miR-30c靶向结合并抑制IFNAR2表达从而促进猪繁殖与呼吸综合征病毒复制，提示IFNAR2表达及下游的抗病毒免疫受miRNA靶向调控。本研究通过生物信息学分析及荧光素酶报告基因检测发现IFNAR2与miR-1260b靶向结合，miR-1260 mimic减弱OE-IFNAR2对STAT1/STAT2蛋白磷酸化的促进作用。敲低circADAMTS-6也可削弱OE-IFNAR2的作用。表明circADAMTS-6通过调节miR-1260b靶向IFNAR2参与AECOPD细胞模型的抗病毒固有免疫调控。

综上所述，本研究在AECOPD细胞模型中阐述circADAMTS-6通过miRNA-ceRNA机制对抗病毒固有免疫发挥调控作用。机制研究发现circADAMTS-6在AECOPD细胞模型中表达减少，使miR-1260b丰度增加，对IFNAR2表达抑制作用增强而损害抗病毒固有免疫信号通路。以上结果为AECOPD抗病毒先天免疫异常及病毒易感性增加提供新的机制解释，同时也为预防及治疗AECOPD提供潜在生物靶点。circRNAs由于其稳定性及安全性高，现在逐渐成为疫苗、抗肿瘤生物疗法研究热点^［28］。未来circADAMTS-6能否作为一种预测或预防COPD急性加重的候选靶标、向临床应用转化等，仍需更多体内动物实验甚至临床试验验证。本研究也存在不足之处：除了气道上皮细胞外，多种免疫细胞也参与先天抗病毒免疫反应，探索参与AECOPD发生、发展的其他细胞中circADAMTS-6的作用也十分必要。circRNAs通过多种机制发挥生物功能，除外miRNA-ceRNA，circADAMTS-6是否通过其他机制产生作用，仍待进一步研究。同时，关于circADAMTS-6的免疫调节作用也需在AECOPD动物模型中验证。

作者贡献度说明：

秦会平：设计文章内容、书写文章并完成部分分子实验；蔡晓瑜：分子及细胞实验；黄斌、高枫：数据统计、表格处理及查阅文献资料；阳芳、王昌明：进行课题指导及文章修改。所有作者都阅读了这篇文章，并同意提交使用该手稿的出版版本。

所有作者声明不存在利益冲突关系。

参考文献

[1] Cunha AS， Raposo B， Dias F， et al. Management of chronic obstructive pulmonary disease： Constraints in patient pathway and mitigation strategies［J］. Port J Public Health，2024，42（2）： 93-100.

[2] Yin P， Wu J， Wang L， et al. The burden of COPD in China and its provinces： Findings from the global burden of disease study 2019［J］. Front Public Health，2022，10：859499.

[3] Chen S， Kuhn M， Prettner K， et al. The global economic burden of chronic obstructive pulmonary disease for 204 countries and territories in 2020‑50： A health ‑augmented macroeconomic modelling study［J］. Lancet Global Health，2023，11（8）： e1183-e1193.

[4] Love ME， Proud D. Respiratory viral and bacterial exacerbations of COPD—the role of the airway epithelium［J］. Cells，2022，11（9）：1416.

[5] Lazear HM， Schoggins JW， Diamond MS. Shared and distinct functions of Type Ⅰ and Type Ⅲ interferons［J］. Immunity，2019，50（4）： 907-923.

[6] Hogea SP， Tudorache E， Fildan AP， et al. Risk factors of chronic obstructive pulmonary disease exacerbations［J］. Clin Respirat J，2020，14（3）： 183-197.

[7] Liu X， Ali MK， Dua K， et al. Circular RNAs： Emerging players in asthma and COPD［J］. Front Cell Dev Biol，2023，11：1267792.

[8] Chen S， Yao Y， Lu S， et al. CircRNA0001859， a new diagnostic and prognostic biomarkers for COPD and AECOPD［J］. BMC Pulmonary Med，2020，20（1）：311.

[9] Gao X， Fang D， Liang Y， et al. Circular RNAs as emerging regulators in COVID-19 pathogenesis and progression［J］. Front Immunol，2022，13：980231.

[10] Shi N， Zhang S， Guo Y， et al. CircRNA_0050463 promotes influenza A virus replication by sponging miR-33b-5p to regulate EEF1A1［J］. Veterinary Microbiol，2021，254：108995.

[11] Shen L， Ji C， Lin J， et al. Regulation of circADAMTS6-miR-324-5p-PIK3R3 ceRNA pathway may be a novel mechanism of IL-1β-induced osteoarthritic chondrocytes［J］. J Bone Mineral Metabol，2022，40（3）： 389-401.

[12] 中华医学会呼吸病学分会， 中华预防医学会呼吸病预防与控制专业委员会， 中国医师协会呼吸医师分会， et al. 慢性阻塞性肺疾病急性加重围出院期管理与随访指南（2024年版）［J］. 中华结核和呼吸杂志，2024，47（11）： 1048-1068.

[13] Respiratory Disease Branch of Chinese Medical Association， Professional Committee of Respiratory Disease Prevention and Control of Chinese Preventive Medicine Association， Respiratory Physician Branch of Chinese Medical Doctor Association， et al. Guidelines for peri-discharge management and follow-up of acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease （2024 Edition） ［J］. Chin J Tuberculosis Respiratory Dis， 2024，47 （11）： 1048-1068.

[14] 中华医学会， 中华医学会杂志社， 中华医学会全科医学分会， et al. 中国慢性阻塞性肺疾病基层诊疗与管理指南（2024年）［J］. 中华全科医师杂志，2024，23（6）： 578-602.

[15] Chinese Medical Association， Chinese Medical Association Press， General Practice Branch of Chinese Medical Associatio. Chinese guideline for management of chronic obstructive pulmonary disease in primary care （2024） ［J］. Chin J General Practit， 2024，23 （6）： 578-602.

[16] 陈典，隆寰宇，张丛溪，等.2025年GOLD慢性阻塞性肺疾病诊断、治疗、管理及预防全球策略更新要点解读［J］.中国全科医学，2025，28（16）：1937-1949.

[17] Chen D， Long HY， Zhang CX， et al. Interpretation of global strategy for the diagnosis，treatment，management and prevention of chronic obstructive pulmonary disease 2025 report ［J］. General Pract Chin， 2025，28（16）：1937-1949.

[18] Danov O， Wolff M， Bartel S， et al. Cigarette smoke affects dendritic cell populations， epithelial barrier function， and the immune response to viral infection with H1N1［J］. Front Med，2020，7：571003.

[19] Qiao D， Hu C， Li Q， et al. Circ-RBMS1 knockdown alleviates CSE-induced apoptosis， inflammation and oxidative stress via up-regulating FBXO11 through miR-197-3p in 16HBE cells［J］. Int J Chronic Obstruct Pulmonary Dis，2021，6： 2105-2118.

[20] Zhou L， Wu B， Yang J， et al. Knockdown of circFOXO3 ameliorates cigarette smoke-induced lung injury in mice［J］. Respiratory Res，2021，22（1）：294.

[21] Shen XR， Liu YY， Qian RQ， et al. Circular RNA expression of peripheral blood mononuclear cells associated with risk of acute exacerbation in smoking chronic obstructive pulmonary disease［J］. Int J Chronic Obstruct Pulmonary Dis，2024，19： 789-797.

[22] Lin J， Xia H， Yu J， et al. CircADAMTS6 via stabilizing CAMK2A is involved in smoking-induced emphysema through driving M2 macrophage polarization［J］. Environment Int，2024，190：108832.

[23] Maarouf M， Wang L， Wang Y， et al. Functional involvement of circRNAs in the innate immune responses to viral infection［J］. Viruses，2023，15（8）：1697.

[24] Zhang X， Chu H， Chik KK， et al. hnRNP C modulates MERS-CoV and SARS-CoV-2 replication by governing the expression of a subset of circRNAs and cognitive mRNAs［J］. Emerg Microbes Infect，2022，11（1）： 519-531.

[25] Li M， Hua Q， Shao Y， et al. Circular RNA circBbs9 promotes PM2.5-induced lung inflammation in mice via NLRP3 inflammasome activation［J］. Environment Int，2020，143：105976.

[26] Du Y， Ding Y， Shi T， et al. Suppression of circXPO1 attenuates cigarette smoke-induced inflammation and cellular senescence of alveolar epithelial cells in chronic obstructive pulmonary disease［J］. Int Immunopharmacol，2022，111：109086.

[27] Li S， Jiang L， Yang Y， et al. Siglec1 enhances inflammation through miR-1260-dependent degradation of IκBα in COPD［J］. Exp Mol Pathol，2020，113：104398.

[28] Ingrd FG， Alfonso MM， Leslie CG， et al. IFNAR2 relevance in the clinical outcome of individuals with severe COVID-19［J］. Front Immunol，2022，13： 949413.

[29] HuangFu WC， Liu J， Harty RN， et al. Cigarette smoking products suppress anti-viral effects of Type Ⅰ interferon via phosphorylation-dependent downregulation of its receptor［J］. FEBS Lett，2008，582（21-22）： 3206-3210.

[30] Liu F， Wang H， Du L， et al. MicroRNA-30c targets the interferon-alpha/beta receptor beta chain to promote type 2 PRRSV infection［J］. J Gen Virol，2018，99（12）： 1671-1680.

[31] O'Leary E， Jiang Y， Kristensen LS， et al. The therapeutic potential of circular RNAs［J］. Nat Rev Genet，2025，26（4）： 230-244.

基金资助

国家自然科学基金地区基金项目(82160014)

国家自然科学基金地区基金项目(82160002)

广西自然科学基金青年基金(2021GXNSFBA220071)