基于PARP9-DTX3L/Notch轴探讨平喘颗粒抑制树突状细胞成熟的机制研究

摘要

目的：观察平喘颗粒对PARP9-DTX3L/Notch轴介导的树突状细胞成熟的影响，从而明确其抑制哮喘气道炎症的分子机制。方法：采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4诱导C57BL/6J小鼠骨髓源单个核细胞分化为树突状细胞，并用肿瘤坏死因子-α刺激建立体外成熟模型。实验分为空白组、模型组、平喘颗粒组、抑制剂组及抑制剂+平喘颗粒组。通过倒置显微镜观察细胞形态；流式细胞术检测树突状细胞纯度及表面分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ、FcεRI的表达；Western blot和RT-qPCR检测PARP9、DTX3L、N1ICD蛋白及mRNA表达，并分析N1ICD核质转位；免疫共沉淀检测PARP9-DTX3L相互作用、N1ICD泛素化及Ub的ADP核糖基化水平。结果：与模型组相比，平喘颗粒含药血清能明显抑制树突状细胞成熟并降低CD80、CD86、MHC-Ⅱ及FcεRI的表达水平（P<0.01）。在分子水平层面，平喘颗粒可下调树突状细胞中PARP9、N1ICD蛋白及PARP9、Hes1、Hes5、Hey1 mRNA的表达水平（P<0.01），并抑制N1ICD入核（P<0.05），而对DTX3L蛋白及mRNA表达和Notch1 mRNA表达无明显影响（P>0.05）。此外，平喘颗粒可抑制PARP9与DTX3L的相互作用，降低Ub的ADP核糖基化修饰及促进N1ICD的泛素化修饰水平，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论：平喘颗粒能有效抑制树突状细胞的成熟，其机制可能与干扰PARP9-DTX3L复合物形成，进而抑制Notch信号通路N1ICD的激活、核转位及其下游靶基因转录有关。

关键词

平喘颗粒 / 树突状细胞 / Notch信号通路 / PARP9-DTX3L复合物 / 哮喘