柞蚕蛹表达人促红细胞生成素的糖基化修饰分析

摘要

利用DNA重组技术在柞蚕蛹中表达重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,rhEPO)，经过亲和层析纯化后，用SDS-PAGE分离纯化各组分，并通过电喷雾电离串联质谱技术(ESI-MS/MS)检测其糖基化修饰.结果显示，在柞蚕蛹中表达的rhEPO比活性约为1190 U/μg，其糖基化修饰位点与人体表达的EPO一致，有3个N-糖基化位点和1个O-糖基化位点.凝集素杂交实验结合质谱结果表明，柞蚕蛹表达的rhEPO的糖链中缺乏唾液酸修饰,而缺少唾液酸修饰的EPO通过鼻腔给药后在多种神经系统疾病的治疗中发挥着重要的作用.所得结果为进一步研究外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(Anthraea pernyi nucleopolyhedrorirus, ApNPV)宿主载体表达系统表达后的糖基化与生物活性提供了依据.

关键词

电喷雾质谱 / 促红细胞生成素 / 柞蚕蛹 / 糖基化