LC-MS/MS测定葡萄中噁唑菌酮残留量的不确定度分析

Uncertainty Analysis in the Determination of Famoxadone Residues in Grapes by LC-MS/MS

摘要

为了分析和评估液相色谱-串联质谱法测定葡萄中噁唑菌酮农药残留量时的不确定度，以《植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》（GB 23200.121-2021）及《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20769-2008）标准方法为研究对象，选择农药噁唑菌酮，针对样品称量、前处理溶剂体积、制备标准溶液及工作曲线拟合等六个方面对方法的测量不确定度进行了评估。结果表明，噁唑菌酮农药残留的相对扩展不确定度约为0.22%(k=2)，其中主要的不确定度来源于液质联用仪的使用、标准溶液的配制、标准曲线拟合以及加标回收率等方面。为了降低检测结果的不确定度，在实际工作中，我们需要从提升设备稳定性、优化标准溶液的配制流程以及提高检测人员的操作技能等方面入手进行改进。同时，我们也应将不确定度的结果作为重要参考，用于判断限量临界值数据是否符合限量标准要求。

关键词

葡萄 / 液相色谱-串联质谱法 / 农药残留 / 不确定度 / GB 23200.121 / GB/T 20769

Key words

grape / Liquid chromatography-tandem mass sprctometry (LC-MS/MS) / pesticide residues / uncertainty / GB 23200.121 / GB/T 20769

0 引言

随着全球农业生产的快速发展和食品贸易的增加，农药残留问题已成为全球食品安全领域的主要挑战之一。世界卫生组织（World Health Organization，WHO）和联合国粮农组织（Food and Agriculture Organization of the United Nations，FAO）指出，农药残留的管理和控制对于确保食品安全和减少公共健康风险至关重要^［1-2］。在众多农药中，噁唑菌酮由于杀菌效果好，单剂和复配制剂等新品种在我国不断登记上市，使用量逐年增加，广泛应用于葡萄、西红柿、马铃薯等作物上。此外，葡萄作为一种高附加值的经济作物，具有较高的农药使用率和残留风险，因此选择葡萄中噁唑菌酮农药残留作为本文研究对象具有重要的现实意义。

测量不确定度是描述测量值分散性及其与测量结果相关性的参数，该参数反映了测量结果的合理赋值^［3-4］。测量不确定度分析被广泛应用于各类检测中，作为评估测量结果可靠性的核心工具，它能够揭示分析过程中的潜在误差来源，进而为优化检测方法提供理论依据^［5］。近年来，液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、特异性好、抗干扰能力强的特点，已成为农药残留检测的金标准^［6-7］。《植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法》（GB 23200.121-2021）和《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20769-2008）已经成为国内目前使用最为广泛的液相色谱-串联质谱法农药残留检测标准。但其制定时并未评定测量不确定度，因此，为确保不同实验环境下的检测结果具有可比性和一致性，如何优化不确定度评估方法，以提升农药残留检测的准确性和精确性，是当前研究的热点之一。综上所述，本文对葡萄中噁唑菌酮的残留量，采用以上两个标准进行定量检测^［8］，检测结果按照《化学分析测量不确定度评定》^［9］及《测量不确定度评定与表示》^［10］的通用要求，全面分析比较在不同试验环境过程中的不确定度分量来源，通过合成扩展不确定度，对运用判定规则，科学判定临界值检测数据合理性、准确性的同时，也为农产品质量安全的监控提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1　材料

1.1.1　仪器

AB Sciex Triple Quad 5500+ 液相色谱-串联质谱仪（C18色谱柱，100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；Me403e电子天平；IKA MS3旋涡混匀器；3-18KS高速冷冻离心机；3K15低速台式离心机；Milli-Q Advantage A10 超纯水系统；T 18 digital ULTRA-TURRAX分散机；RV 10 digital V旋转蒸发仪。

1.1.2　试剂与耗材

乙腈、甲醇（色谱纯）；甲酸、甲酸铵（色谱纯）；氯化钠、无水硫酸钠（分析纯）；噁唑菌酮标准物质BW900683-1000-A（坛墨质检科技股份有限公司）；NH₂固相萃取柱（1 g/6 mL）、0.22 μm尼龙微孔滤膜（13 mm）、QuEChERS萃取试剂盒及分散净化试剂盒。

1.2　方法

1.2.1　样品前处理

实验参考 方法1：《植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》（GB 23200.121-2021），方法2：《水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法》（GB/T 20769-2008）。

1.2.2　仪器条件

方法1和方法2的色谱条件相同，条件如下：C18色谱柱100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱温为30 ℃；进样体积为5.0 μL；体积分数0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵的水溶液作为流动相A相，体积分数0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵的甲醇溶液作为B相；梯度洗脱程序：0.0~1.0 min，90% A；1.01~6.0 min，90%~2% A；6.01~8.0 min，2% A；8.01~13.0 min，90% A；流速为0.2 mL/min。

方法1和方法2的质谱条件相同，条件如下：离子源类型：电喷雾离子源（ESI源）；离子源温度：550 ℃；检测方式：多反应离子监测（MRM）；扫描方式：正离子扫描；电喷雾电压：5 500 V；辅助气1：379 kPa；辅助气2：379 kPa；气帘气：241 kPa；碰撞气：55 kPa。离子对和碰撞能量参数见表1。

1.2.3　标准物质配制

1.2.3.1　标准储备液的配制

准确吸取噁唑菌酮标准物质0.10 mL于100 mL容量瓶中，以乙腈定容，得到1.0 mg/L 的标准储备液，于棕色瓶中-18 ℃冷冻保存。

1.2.3.2　基质匹配标准工作溶液系列配制

按照1.2.1步骤的方法制备噁唑菌酮基质空白溶液，准确吸取适量噁唑菌酮标准储备液，至1 mL容量瓶，用基质空白溶液定容，得到标准工作中间液^［11］。分别用基质空白溶液逐级稀释成0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500 mg/L的系列标准工作液。

1.3　不确定度分析

1.3.1　数学模型的建立

根据 GB 23200.121-2021和GB/T 20769-2008方法（表2），葡萄中噁唑菌酮残留含量（X）按式（1）计算：

\begin{array}{c}X=\frac{c\times V\times f}{m}\end{array} , （1）

式中：c：标准曲线被测组分质量浓度（mg/L）；V：样品最终定容体积（mL）；f：样品稀释倍数（GB 23200.121-2021为 1、GB/T 20769-2008为 2）；m：样品称样质量（g）； X：葡萄中噁唑菌酮含量（mg/kg）。

1.3.2　不确定度来源分析

按照检测流程，样品抽样代表性及制样产生的不确定度我们忽略不计^［12］。由数学模型得出不确定度分量包括：样品称重的不确定度u（m）、样品前处理过程溶液体积的不确定度u（V）、液质联用仪的不确定度u（inst）、标准溶液配制及标准曲线拟合的不确定度u（c）、检测方法重复性u（rep）和样品加标回收率u（R）六个方面^［13］。

1.4　数据分析处理

数据统计处理分析利用软件Excel 2013进行。

2 分析与结果

2.1　不确定度分量来源分析

液质联用法测定噁唑菌酮的测量不确定度分量主要来源于样品称样质量、样品前处理过程溶液体积等6个方面，据此可得合成标准不确定度，如式（2）所示。

\begin{array}{c}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}\left(X\right)=\sqrt[]{\begin{array}{l}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(m\right)+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(V\right)+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(c\right)+\\ u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(\mathrm{i}\mathrm{n}\mathrm{s}\mathrm{t}\right)+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(R\right)+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}\left(\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{p}\right)\mathrm{。}\end{array}}\end{array} （2）

2.2　不确定度的计算公式

A类标准不确定度及相对标准不确定度计算公式见式（3）—式（6） ^［14］。当数据估计接近正态分布，4≤n≤9时，使用极差法；当n≥10时，使用贝塞尔公式^［15］

\begin{array}{c}s\left(x\right)=\frac{R\left(\mathrm{极}\mathrm{差}\right)}{c}\end{array}，（3）

\begin{array}{c}s\left(x\right)=\sqrt[]{\frac{\mathrm{1}}{n-\mathrm{1}}{\displaystyle \sum _{i=\mathrm{1}}^n}(x_i{-\overline{x})}^{\mathrm{2}}}\end{array} , （4）

\begin{array}{c}u\left(x\right)=\frac{s(x)}{\sqrt[]{n}}\end{array} , （5）

\begin{array}{c}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}\left(x\right)=\frac{u(x)}{\overline{x}}\times \mathrm{100}\mathrm{\%}\end{array}。（6）

B类标准不确定度及相对标准不确定度计算方法见式（7）—式（9），式（7）中a表示被测可能值的区间半宽度，k表示包含因子^［16］。

\begin{array}{c}u\left(x\right)=\frac{a}{k}\end{array}，（7）

\begin{array}{c}u\left(x\right)=\sqrt[]{{u_{\mathrm{1}}}^{\mathrm{2}}\left(x\right)+{u_{\mathrm{2}}}^{\mathrm{2}}\left(x\right)}\end{array} , （8）

\begin{array}{c}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}\left(x\right)=\frac{u\left(x\right)}{x}\times \mathrm{100}\mathrm{\%}\end{array}。（9）

扩展不确定度U由合成标准不确定度u（x）乘包含因子k得到^［17］，按公式（10）计算：

\begin{array}{c}U=ku(x)\end{array} \mathrm{。} （10）

2.3　样品质量称重（m）引入的相对标准不确定度u _rel（m）

天平的称量重复性、偏载误差及允许误差这三个方面是称量质量的不确定度主要来源^［18］，以方法1为例。

2.3.1　允许误差

样品称量使用分度为0.001 g的高准确度级分析天平，称量样品10.000 g，通过其校准证书得到，在0~50 g称量质量的范围内最大允许误差为±0.005 g，被测量质量落在该质量可能值区间内的任意值处的可能性相同，假设为均匀分布^［19］，并按照均匀分布处理，属B类不确定度，k = \sqrt{\mathrm{3}}，则不确定度u ₁（m）=0.005/ \sqrt{\mathrm{3}}=0.002 886 8 g。

2.3.2　偏载误差^［20］

天平校准证书的偏载误差最小值为0.000 g，最大值为+0.001 g，校准时将秤盘划分为5个区域，测试5个点位，按照极差法计算，查得当n=5时，极差系数C ₁为2.33^［21］，则不确定度u ₂（m）=R/C/ \sqrt{\mathrm{5}}=0.001/2.33/ \sqrt{\mathrm{5}}=0.000 191 9 g。

2.3.3　重复性

天平校准证书的重复性误差为0.002 g，根据JJG 1036－2022《电子天平》，使用中检查的天平测量次数不得少于6次，按照极差法计算，查得当n=6时，极差系数C ₂为2.53，则不确定度u ₃（m）=R/C/ \sqrt{\mathrm{6}}=0.002/2.53/ \sqrt{\mathrm{6}}=0.000 322 7 g。

u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}} \left(m\right) = \frac{\sqrt[]{{u_{\mathrm{1}}}^{\mathrm{2}}\left(m\right)+{u_{\mathrm{2}}}^{\mathrm{2}}\left(m\right){u_{\mathrm{3}}}^{\mathrm{2}}\left(m\right)}}{m} = \mathrm{0.002} \mathrm{911} \mathrm{1} g / \mathrm{10} g = \mathrm{0.000} \mathrm{291} \mathrm{1} \mathrm{。}

方法2中，u _rel（m）=0.002 911 1 g/20 g=0.000 145 5。

2.4　样品提取溶剂体积（V）引入的相对标准不确定度u _rel（V）

2.4.1　溶剂加入总体积V ₁引入的相对标准不确定度u _rel（V ₁）

方法1中来源于两个方面：第一，单标线吸量管引入的标准不确定度u ₁（V ₁），本实验采用A级10 mL单标线吸量管，通过其校准证书，查得标称容量为10 mL，对应的容量允差为±0.020 mL^［22］，单标线吸量管的吸量值落在该分度线区间中心的可能性最大，假设为三角分布，并按照三角分布处理，属B类不确定度，k= \sqrt{\mathrm{6}}，则u ₁（V ₁）=0.020/ \sqrt{\mathrm{6}}=0.008 165 mL；第二，溶液的温度与校准时的温度差异产生的标准不确定度u ₂（V ₁），提取溶剂乙腈的体积膨胀系数1.37×10^-3/℃，实验室环境温度变化范围（20±4） ℃，假设温度在此区间内任意值的可能性相同，即呈均匀分布，并按均匀分布处理^［23］，属B类不确定度，k = \sqrt{\mathrm{3}}，u ₂（V ₁）=4×10×1.37×10^-3/ \sqrt{\mathrm{3}}=0.031 64 mL^［24］。则加入溶剂总体积V ₁的相对标准不确定度 u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}} ( V_{\mathrm{1}} ) = \sqrt{{u_{\mathrm{1}}}^{\mathrm{2}}(V_{\mathrm{1}})+{u_{\mathrm{2}}}^{\mathrm{2}}(V_{\mathrm{1}})} / V_{\mathrm{1}} \times \mathrm{100} \mathrm{\%} =0.326 8%，同时计算方法2结果，结果见表3。

2.4.2　分取体积V ₂引入的相对标准不确定度u _rel（V ₂）

方法1无分取体积，仅考虑方法2，方法2中，分取样液体积引入的相对标准不确定度来自两个方面：首先是单标线吸量管吸取体积变动性的不确定度u ₁（V ₂），A级20 mL单标线吸量管分取20.00 mL提取液，允差为±0.030 mL，不确定度引入计算过程参照u ₁（V ₁）；其次是实验室温度变化引入的标准不确定度u₂（V ₂），参照u ₂（V ₁）；则分取体积V引入的相对标准不确定度u _rel（V ₂）参照u _rel（V ₁），结果见表4。

2.4.3　样品定容体积V ₃引入的相对标准不确定度u _rel（V ₃）

方法1无定容体积，仅考虑方法2，两个方面是定容体积引入的相对标准不确定度：一是用A级1 mL单标线吸量管时，体积吸取变动性产生的标准不确定度u ₁（V ₃），用A级1 mL单标线吸量管吸取1.00 mL提取液，允差为±0.007 mL，计算参照u ₁（V ₁）；第二是实验室温度变化引入的标准不确定度u ₂（V ₃），用乙腈∶水（3∶2）定容，乙腈的体积膨胀系数为1.37×10^-3/℃，水的体积膨胀系数为2.08×10^-4/℃，计算参照u ₂（V ₁）。则定容体积V ₃引入的相对标准不确定度u_rel （V ₃）参照u _rel（V ₁），结果见表5。

将以上的溶液体积相对不确定度分量合成得到u_rel （V），见式（11）及表6。

\begin{array}{c}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}\left(V\right)=\sqrt[]{u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}(V_{\mathrm{1}})+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}(V_{\mathrm{2}})+u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}^{\mathrm{2}}(V_{\mathrm{3}})}\end{array} \mathrm{。} （11）

2.5　噁唑菌酮标准曲线制备及拟合产生的相对标准不确定度u _rel（c）

2.5.1　标准物质引入的相对标准不确定度u _rel（c ₁）

噁唑菌酮标准物质质量浓度为1 000.0 mg/L，其相对扩展不确定度查询标准物质证书为2 %（包含因子k =2），计算得出其相对标准不确定度u _rel（c ₁）为1.00%。

2.5.2　标准工作曲线制备过程引入的相对标准不确定度u _rel（c ₂）

1 mL噁唑菌酮标准物质通过A级1 mL单标线吸量管吸取，移至A级10 mL容量瓶中，乙腈定容，得到标准储备液（100.0 mg/L），逐级稀释得到标准溶液（1.0 mg/L），用移液枪将1.0 mg/L的标准溶液逐级稀释，得系列标准工作液（0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500 mg/L）。故四个方面是标准工作曲线制备过程产生的相对标准不确定度主要来源：首先，单标线吸量管引入的相对不确定度u _rel（c _{2-1- v} ），逐级储备液稀释3次，容量允差为±0.007 mL，计算参照u ₁（V ₃）；第二，A级10 mL容量瓶定容体积变动性引入的相对不确定度u _rel（c _{2-2-1- v} ），逐级储备液稀释3次，容量允差为±0.02 mL，A级1 mL容量瓶定容体积变动性引入的相对不确定度u _rel（c _{2-2-2- v} ），标准工作液共定容7次，容量允差为±0.01 mL，单标线容量瓶的被定容值落在该分度线区间中心的可能性最大，假设为三角分布，并按照三角分布处理，属于B类不确定度，k= \sqrt{\mathrm{6}}，则u _rel（c _{2-2-1- v} ）=0.020/ \sqrt{\mathrm{6}}=0.008 165 mL，u _rel（c _{2-2-2- v} ）=0.010/ \sqrt{\mathrm{6}}=0.004 082 mL；第三，移液枪体积变动性引入的相对不确定度u _rel（c _{2-3- v} ）。移液枪Brand（0.02~0.2 mL）时，移取溶液体积落在该移取溶液体积可能值区间内的任意值处的可能性相同，假设为均匀分布，并按均匀分布处理，属B类不确定度，k= \sqrt{\mathrm{3}}，其中移取体积为0.02 mL时，引入的相对不确定度为u _rel（c _{2-3-1- v} ），容量允差为±4.0%^［25］，测量重复性为2%，移取1次^［26］；移取体积为0.1 mL时，引入的相对不确定度为u _rel（c _{2-3-2- v} ），容量允差为±2.0%，测量重复性为1%，移取3次；移取体积为0.2 mL时，引入的相对不确定度为u _rel（c _{2-3-3- v} ），容量允差为±1.5%，测量重复性为1%，移取1次。移液枪Brand（0.1 mL~1.0 mL）时，按均匀分布，属B类不确定度评定，k = \sqrt{\mathrm{3}}，移取体积为0.5 mL时，引入的相对不确定度为u _rel（c _{2-3-4- v} ），容量允差为±1.0%，测量重复性为0.5%，移取2次。第四，实验室的环境温度变化在（20±4） ℃，整个标准工作溶液配制过程体积变化均受到温度影响，噁唑菌酮标准用乙腈定容，计算温度影响的不确定度见u ₂（V ₁）。配置过程及移液枪移取过程引入的不确定度见表7及表8。标准曲线制备过程中引入的相对标准不确定度u _rel（c ₂）见式（12） ^［27］。

\begin{array}{c}{u}_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}\left(c_{\mathrm{2}}\right)=\sqrt[]{\begin{array}{l}{u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{1}}\right)\times \mathrm{3}+{u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{1}}\right)\times \mathrm{7}+\\ {u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{2}}\right)\times \mathrm{3}+{u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{3}\mathrm{-}\mathrm{1}}\right)+\\ {u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{3}\mathrm{-}\mathrm{2}}\right)\times \mathrm{3}+{u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{3}\mathrm{-}\mathrm{3}}\right)+\\ {u_{\mathrm{r}\mathrm{e}\mathrm{l}}}^{\mathrm{2}}\left(c_{\mathrm{2}\mathrm{-}\mathrm{3}\mathrm{-}\mathrm{4}}\right)\times \mathrm{2}\end{array}}\end{array} \mathrm{。} （12）

2.5.3　标准曲线拟合引入的相对标准不确定度u _rel（c ₀）

按1.2.3.2配制的噁唑菌酮系列标准工作溶液，每个浓度点测量10次，通过液质联用仪检测，标准溶液浓度与其响应数据采用最小二乘法线性回归处理^［28］。

利用式（13）计算出噁唑菌酮标准溶液响应残差的标准差S _A，a为截距；b为斜率；n为标准溶液的测定总次数；y_i 为噁唑菌酮第i次的响应值；x_i 为噁唑菌酮第i次的浓度；在系列标准曲线溶液中，各浓度重复测定10次（n=7×10=70）。拟合曲线及线性关系的确定系数见表9。

拟合工作曲线引入的不确定度U（c ₀）用式（14）计算。x ₀为利用工作曲线得到的样品浓度平均值见表9； \overline{x}表示各系列标准溶液浓度平均值为0.126 4 mg/L；p为测定次数（p=10）^［29］。

标准曲线拟合用A类不确定度评定，待测样品重复测定10次，浓度范围为0.160 mg/L~0.181 mg/L，标准曲线拟合引入不确定度结果计算见表9。当噁唑菌酮的测定浓度为0.172 0 mg/L，引入相对标准不确定度为2.540%。

\begin{array}{c}{S}_{\mathrm{A}}=\sqrt[]{\frac{{\sum }_{i=\mathrm{1}}^n[y_i{-\left(a+b{x}_i\right)]}^{\mathrm{2}}}{n-\mathrm{2}}}\end{array} , （13）

\begin{array}{c}U(c_{\mathrm{0}})=\frac{S_{\mathrm{A}}}{b}\times \sqrt[]{\frac{\mathrm{1}}{p}+\frac{\mathrm{1}}{n}+\frac{(x_{\mathrm{0}}{-\overline{x})}^{\mathrm{2}}}{{\sum }_{i=\mathrm{1}}^n(x_i{-\overline{x})}^{\mathrm{2}}}}\end{array} \mathrm{。} （14）

噁唑菌酮标准曲线制备及拟合不确定度主要来源为标准物质、标准工作曲线制备过程、标准曲线拟合这三个方面，因此产生的相对标准不确定度u _rel（c）结果见表10。

2.6　液质联用仪引入的相对标准不确定度u _rel（inst）

液质联用仪产生的相对标准不确定度u _rel（inst）。由仪器校准证书可知相对扩展不确定度U=6%（k=2），则相对标准不确定度为u _rel（inst）=3.0%。

2.7　样品加标回收率R引入的相对标准不确定度u _rel（R）

准确称取10.0 g基质空白试样10份，分别加入0.1 mL的10 mg/L噁唑菌酮标准工作溶液，制备成含量为0.10 mg/kg待检测样品，用方法1前处理步骤测定样品加标回收率；同时准确称取20.0 g基质空白试样10份，分别加入0.2 mL的1.0 mg/L噁唑菌酮标准工作溶液，制备成含量为0.01 mg/kg待检测样品，用方法2前处理步骤测定样品加标回收率，结果见图1。样品加标回收率用R表示，用贝塞尔公式，评定A类不确定度。产生的相对标准不确定度u _rel（R）见表11。

2.8　方法重复性引入的相对标准不确定度u _rel（rep）

依照检测标准各自测定平行样品10份，方法标准总重复性产生的相对标准不确定度u _rel（rep）见图2、表12。

2.9　测量相对标准不确定度合成及相对扩展不确定度评定

将上述各不确定度分量合成后，得到该方法的相对合成标准不确定度及扩展不确定度，根据不确定度评估指南，采用95%置信区间，包含因子k = 2时，结果见表13 ^［30］。

GB 23200.121-2021方法测得的噁唑菌酮残留量的扩展不确定度结果见公式（15），GB/T 20769-2008方法的结果见公式（16）。

\begin{array}{c}{X}_{\mathrm{1}}=\left[\overline{X}\pm U\left(X\right)\right]=\left(\mathrm{0.017}\mathrm{27}\pm \mathrm{0.002}\mathrm{205}\right),k=\mathrm{2}\end{array} , （15）

\begin{array}{c}{X}_{\mathrm{2}}=\left[\overline{X}\pm \mathrm{U}\left(X\right)\right]=\left(\mathrm{0.017}\mathrm{18}\pm \mathrm{0.002}\mathrm{184}\right),k=\mathrm{2}\end{array} \mathrm{。} （16）

3 分析与讨论

研究结果表明，两种检测方法不确定度的来源主要包括样品称量、前处理加入及定容溶剂体积、液质联用仪本身及检测方法重复性、标准溶液配制及曲线拟合、样品加标回收率六个方面，分析各分量产生的相对标准不确定度发现：对噁唑菌酮残留量检测的不确定度影响较大的是标准溶液配制及标准曲线拟合和仪器本身，其他因素影响次之，对噁唑菌酮相对标准不确定度的影响最小的是样品称量，可忽略。在实际检测过程中可考虑从如下几个方面降低测量不确定度^［31］。

3.1　标准溶液配制过程

配制标准溶液时，采用从标准物质到工作液经过3次梯度逐级稀释，且在配制系列标准曲线工作液时减少移液器的使用，因为相较于分度吸量管或单标线吸量管，移液器的扩展不确定度较大。在标准溶液配制过程中应尽量避免步骤过多，要减少并简化配制过程，使用精度较高的移液和定容容器稀释配制标准溶液，从而降低不确定度。

3.2　仪器设备的稳定性

实验测定前应严格按照仪器操作规程，做好液质联用仪、天平等仪器设备调试准备工作，主要仪器设备的开机预热必不可少。仪器设备定期检定校准的同时做好期间核查，同时做好设备及仪器的日常维护，定期清洗液质联用仪的离子源及锥孔，定期对设备管路、色谱柱等进行冲洗。

3.3　前处理过程关键环节的控制

该研究中农药残留使用 AB Sciex Triple Quad 5500+超高效液相色谱-串联质谱仪检测，该设备具有较高精度和灵敏度，在试验中，应尽量避免交叉污染，特别是在样品处理、标液配制及上机检测过程中。为降低样品中糖类和色素等基质干扰，前处理净化过程应规范操作，以减少不确定度。

4 结论

本试验参照GB 23200.121-2021标准和GB/T 20769-2008标准方法检测葡萄中噁唑菌酮的残留量，分别计算两种检测方法测量结果的相对扩展不确定度为0.2205%和0.2184%，今后应严格控制标准溶液配制过程，着重把控样品前处理环节等关键步骤，做好主要仪器设备的维护，确保设备的稳定性，全面降低测量不确定度，提高测量结果的精密度和准确度。

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基金资助

食品药品安全防控山西省重点实验室资金(202204010931006)