番茄潜叶蛾CYP4M131基因克隆及功能分析

摘要

为有效防控番茄潜叶蛾Tuta absoluta，利用PCR技术结合cDNA末端快速扩增克隆番茄潜叶蛾体内细胞色素P450解毒酶系基因CYP4M131，对其进行生物信息学分析，采用实时荧光定量PCR技术分析其表达谱，利用RNA干扰技术解析其功能。结果显示：番茄潜叶蛾CYP4M131开放阅读框为1 518 bp，编码505个氨基酸残基，CYP4M131氨基酸序列与马铃薯块茎蛾Phthorimaea operculella的氨基酸序列聚为一支。CYP4M131在番茄潜叶蛾所有发育阶段及头、体壁、中肠、脂肪体4种组织中均有表达，其中在蛹期和中肠中的相对表达量最高。注射dsCYP4M131后7 h和96 h，番茄潜叶蛾体内CYP4M131的沉默效率分别为55.6%和86.2%，且番茄潜叶蛾在蜕皮化蛹过程中出现蜷缩、腹部凹陷等表型。注射dsCYP4M131后，番茄潜叶蛾幼虫死亡率显著增加，注射后16 d的死亡率高达88.7%，蛹重仅为1.51 mg，化蛹率和羽化率分别为48.8%和23.8%，显著低于对照。注射dsCYP4M131后，乙基多杀菌素LC₅₀处理的番茄潜叶蛾3龄幼虫死亡率比对照显著增加。表明CYP4M131参与调控番茄潜叶蛾的化蛹过程和其对乙基多杀菌素的代谢。

关键词

番茄潜叶蛾 / 细胞色素P450解毒酶 / 杀虫剂 / RNA干扰 / 表达谱 / 功能