与烟草曲茎病毒V2蛋白互作的本氏烟SKP1.1蛋白负调控病毒侵染

杨旸; 黄普鑫; 袁园; 李俏; 朱雯颖; 青玲; 李明骏

doi:10.13802/j.cnki.zwbhxb.2025.2024077

植物保护学报 ›› 2025, Vol. 52 ›› Issue (01) : 144 -156. DOI: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2025.2024077

与烟草曲茎病毒V2蛋白互作的本氏烟SKP1.1蛋白负调控病毒侵染

杨旸, 黄普鑫, 袁园, 李俏, 朱雯颖, 青玲, 李明骏

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

PDF

摘要

为明确烟草曲茎病毒（tobacco curly shoot virus,TbCSV）V2蛋白在TbCSV侵染寄主过程中发挥的作用，基于前期以TbCSV V2蛋白为诱饵筛选到的与之互作的本氏烟Nicotiana benthamiana泛素连接酶E3复合体SKP1/CUL1/F-box(SCF)组分NbSKP1.1蛋白（GenBank登录号为AKQ53343.1），采用双分子荧光互补、荧光素酶互补成像和免疫共沉淀试验来验证V2蛋白与NbSKP1.1蛋白的互作，并通过实时荧光定量PCR技术检验NbSKP1.1基因的表达情况，采用激光共聚焦显微镜观察NbSKP1.1的亚细胞定位，通过根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的蛋白瞬时表达系统和Western blot试验分析NbSKP1.1对V2蛋白的沉默抑制子活性和蛋白稳定性的影响。结果显示：TbCSV侵染可以显著上调NbSKP1.1基因的表达，通过烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导NbSKP1下调表达导致TbCSV侵染症状加重，病毒积累量显著上调，表明NbSKP1.1受到TbCSV侵染的诱导进而抑制病毒侵染。NbSKP1.1蛋白分布于细胞质及细胞核中，且TbCSV侵染或与V2蛋白共表达不影响其亚细胞定位。V2蛋白与NbSKP1.1蛋白瞬时共表达试验表明NbSKP1.1减弱了V2蛋白的沉默抑制子活性，但并不能直接导致V2蛋白降解，暗示NbSKP1.1对V2蛋白沉默抑制子活性的削弱可能是其抑制TbCSV侵染的一种机制。表明泛素化途径的寄主因子可以通过直接靶向TbCSV编码的病毒蛋白，干扰病毒蛋白的功能并抑制病毒侵染。