藻蓝蛋白裂合酶CpcS1与CpcT1的复合物初步研究

摘要

研究证实裂合酶CpcS1、CpcT1能分别催化藻蓝蛋白β亚基(简称CpcB)的两个色素结合位点(84位和155位)共价偶联藻蓝色素PCB(phycocyanobilin),但通过实验发现仅CpcS1和CpcT1共同催化CpcB无法生成天然构像的色素蛋白.为了挑选出辅助裂合酶,经过综合分析,筛选出6个与CpcS1、CpcT1同源的裂合酶.将编码裂合酶的基因按照本实验的需求,重新构建在其它载体上,在大肠杆菌BL21体内表达出蛋白后,分别与CpcS1、CpcT1混合,利用亲和层析分离,然后通过蛋白质电泳图谱初步分析裂合酶之间形成复合物的情况.能形成复合物的裂合酶,再与CpcS1、CpcT1及脱辅基蛋白共同转入大肠杆菌BL21体内进行体内重组研究.结果表明,CpcT1能分别与CpcS1、CpcT2、PecF形成复合物,但这些复合物均不能辅助催化CpcB生成天然产物.

关键词

藻蓝蛋白β亚基 / 裂合酶CpcS1和CpcT1 / 复合物 / 亲和层析