三角梅SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选

武晓燕; 唐源江; 曹雯静

doi:10.19603/j.cnki.1000-1190.2012.03.018

华中师范大学学报（自然科学版） ›› 2012, Vol. 46 ›› Issue (03) : 335 -339. DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2012.03.018

三角梅SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选

武晓燕, 唐源江, 曹雯静

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摘要

利用L9(34)正交试验设计,对影响PCR反应的TaqDNA聚合酶量、dNTP浓度、Mg2+浓度和引物浓度4个因素以及模板DNA浓度进行了三角梅SRAP-PCR扩增反应条件优化研究,并对引物进行了全面筛选.三角梅SRAP-PCR优化反应体系结果为:2.5μL 10×PCR buffer、60ng模板DNA、TaqDNA聚合酶1.0U、dNTP 0.25mmol/L、Mg2+2.5mmol/L、引物0.3μmol/L,总体积25μL.运用该结果从208对引物组合中共筛选出扩增条带清晰,多态性丰富的SRAP引物27对.优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用SRAP标记技术进行三角梅遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础.