pEZsiRNA6.1/hHif-1α稳定转染食管鳞癌EC-9706细胞系的建立

汲翔; 曹博; 金硕; 李军; 李懿; 范丹丹; 郭欢; 汲振余; 范天黎

doi:10.19603/j.cnki.1000-1190.2012.06.021

华中师范大学学报（自然科学版） ›› 2012, Vol. 46 ›› Issue (06) : 740 -743. DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2012.06.021

pEZsiRNA6.1/hHif-1α稳定转染食管鳞癌EC-9706细胞系的建立

汲翔, 曹博, 金硕, 李军, 李懿, 范丹丹, 郭欢, 汲振余, 范天黎

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摘要

利用基因工程技术将合成的HIF-1αshRNA与pEZsiRNA6.1空载体连接,构建pEZsiR-NA6.1/hHif-1α载体,PCR和测序结果表明所构建的pEZsiRNA6.1/hHif-1α重组载体正确.进一步将所构建的载体转染人食管鳞癌EC-9706细胞系,利用G418筛选HIF-1α稳定干扰的细胞系,荧光显微镜检测结果表明:稳定转染pEZsiRNA6.1/hHif-1α的EC-9706细胞均有绿色荧光蛋白示踪.经CoCl2诱导模拟缺氧4h,Western Blot结果显示pEZsiRNA6.1/hHif-1α能有效抑制EC-9706缺氧食管癌细胞HIF-1α的诱导表达.