伤寒沙门菌Mig-14蛋白部分密码子优化后的表达及多克隆抗体制备

张红; 生秀梅; 徐顺高; 黄新祥; 许化溪

doi:10.19603/j.cnki.1000-1190.2014.02.018

华中师范大学学报（自然科学版） ›› 2014, Vol. 48 ›› Issue (02) : 246 -250. DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2014.02.018

伤寒沙门菌Mig-14蛋白部分密码子优化后的表达及多克隆抗体制备

张红, 生秀梅, 徐顺高, 黄新祥, 许化溪

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摘要

通过原核表达Mig-14蛋白,制备相应多克隆抗体,用于后续Mig-14分子功能研究,为探寻Mig-14拮抗PB分子机制奠定基础.经密码子偏爱性分析显示mig-14基因含有8%的稀有密码子,综合考虑密码子偏好性、GC含量、限制性酶切位点等影响因素对密码子进行优化,重新合成mig-14基因,PCR获得周质空间部分,克隆至表达载体pET22b(+),并转入大肠埃希菌JM109中表达,KCl染色后切胶纯化的蛋白作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体.Mig-14蛋白多克隆抗体的制备为后续免疫共沉淀研究Mig-14的作用蛋白奠定了基础.