鱼腥藻PCC7120染色体基因对asr0757/alr0758的表达优化及其鉴定

摘要

NCBI预测鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758可能构成一个毒素-抗毒素系统.为研究其是否属于毒素-抗毒素系统家族,分别构建这两个基因的表达载体.用1.0 mM IPTG诱导重组菌表达,优化表达条件,并对表达出的蛋白进行纯化与western blot检测.SDSPAGE结果显示:asr0757与alr0758在37℃下诱导6h后,均成功诱导表达出目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.9KD).抗毒素表达量较好,毒素alr0758表达量较少.通过设置诱导时间梯度和IPTG浓度梯度优化毒素基因表达条件,优化结果显示:毒素基因alr0758在28℃,IPTG浓度为0.4mM,诱导10h时有最大表达量.蛋白纯化与western blot结果证实诱导表达的蛋白为目的蛋白.

关键词

鱼腥藻PCC7120 / asr0757/alr0758 / 表达 / 优化 / 鉴定

基金资助

国家自然科学基金项目(31001099/C190101); 中央高校自然科学基金项目(CJSl3003;CJS13004); 中南民族大学微生物与生物转化重点实验室项目(XJS09002); “十二五”国家级中南民族大学民族药学实验教学中心建设项目