鱼腥藻PCC7120染色体基因对asr0757/alr0758的表达优化及其鉴定

陈洁; 陈思礼; 吴汇兰

doi:10.19603/j.cnki.1000-1190.2016.02.017

华中师范大学学报（自然科学版） ›› 2016, Vol. 50 ›› Issue (02) : 263 -268. DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2016.02.017

鱼腥藻PCC7120染色体基因对asr0757/alr0758的表达优化及其鉴定

陈洁, 陈思礼, 吴汇兰

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摘要

NCBI预测鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758可能构成一个毒素-抗毒素系统.为研究其是否属于毒素-抗毒素系统家族,分别构建这两个基因的表达载体.用1.0 mM IPTG诱导重组菌表达,优化表达条件,并对表达出的蛋白进行纯化与western blot检测.SDSPAGE结果显示:asr0757与alr0758在37℃下诱导6h后,均成功诱导表达出目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.9KD).抗毒素表达量较好,毒素alr0758表达量较少.通过设置诱导时间梯度和IPTG浓度梯度优化毒素基因表达条件,优化结果显示:毒素基因alr0758在28℃,IPTG浓度为0.4mM,诱导10h时有最大表达量.蛋白纯化与western blot结果证实诱导表达的蛋白为目的蛋白.