重组毕赤酵母植酸酶N-糖基化位点质谱鉴定

张琪; 吴秀菊; 俞婷; 王志林; 崔百元; 朱庆锋; 贝锦龙

doi:10.19603/j.cnki.1000-1190.2018.05.015

华中师范大学学报（自然科学版） ›› 2018, Vol. 52 ›› Issue (05) : 678 -685. DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2018.05.015

重组毕赤酵母植酸酶N-糖基化位点质谱鉴定

张琪, 吴秀菊, 俞婷, 王志林, 崔百元, 朱庆锋, 贝锦龙

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

摘要

为系统评估重组毕赤酵母植酸酶的N-糖基化充分性,建立了一种通过联用高效液相色谱-串级质谱来分析植酸酶氨基酸序列及N-糖基化位点的技术.分别发酵了3株基因组已整合不同植酸酶基因的毕赤酵母.发酵液上清经离子交换与凝胶过滤后获得纯化的植酸酶.使用PNGase F或Endo H脱糖基化酶处理植酸酶后,用胰蛋白酶消化脱糖基化产物.通过纳升级高效液相色谱分离胰蛋白酶切产生的肽段混合物.并在联用的串级质谱上进行肽段测序与N-糖基化位点鉴定.结果显示3种植酸酶蛋白的可检测序列覆盖率均在69%以上,且与文献报道不同,均存在糖基化位点修饰不充分的现象.本实验结果证明了高效液相色谱-串级质谱联用法检测植酸酶N-糖基化位点的有效性,并为植酸酶的糖基化研究提供了新的基础.