茯砖茶冠突散囊菌EcUGT88E3基因的克隆、表达及分子特性分析

摘要

为探究冠突散囊菌UDP-葡萄糖基转移酶EcUGT88E3在调控黄酮糖苷类物质合成中的作用，利用同源序列克隆EcUGT88E3基因，并进行生物信息学分析；构建了pET28a-EcUGT88E3/BL21(DE3)表达系统并优化诱导条件，实现EcUGT88E3基因的异源表达与分离纯化。结果显示：EcUGT88E3基因全长1 704 bp，其中5′-UTR为75 bp,3′-UTR为207 bp，完整开放阅读框为1 422 bp，编码473个氨基酸。生物信息学预测其编码的蛋白为疏水性蛋白，分子质量为52.03 ku。蛋白结构预测表明EcUGT88E3不具有信号肽和跨膜区特征，属于微粒体定位蛋白，含有GT1及GT-B超家族特征结构域。EcUGT88E3重组蛋白以包涵体形式表达，其原核表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中最佳诱导条件为27℃、0.2 mmol/L IPTG培养4 h。

关键词

茯砖茶 / 冠突散囊菌 / 糖基转移酶 / 基因克隆 / 生物信息学分析 / 原核表达