脐血CD34⁺造血干细胞来源的树突状细胞疫苗体外抗乳腺癌效果评价及优化

摘要

目的:优化脐血CD34⁺造血干细胞来源的树突状细胞（dendritic cell, DC）体外诱导培养方法，制备负载肿瘤细胞裂解物的DC疫苗并探索DC疫苗的抗乳腺癌活性。方法:免疫磁珠分选脐血单个核细胞后获得CD34⁺造血干细胞，流式细胞术鉴定CD34⁺造血干细胞纯度，经扩增培养和诱导分化培养获得DC,比较各因子在不同组合和不同时机加入对所获得DC表型的影响；通过流式细胞术检测DC对异硫氰酸荧光素-卵白蛋白（FITC conjugated ovalbumin, FITC-OVA）的抗原吞噬活性，CCK-8方法检测DC疫苗对异源脐血单个核细胞的刺激增殖能力，乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）方法检测负载肿瘤细胞裂解物抗原的DC疫苗激活后的T细胞对乳腺癌细胞的体外杀伤活性。结果:扩增培养阶段，IMDM培养基+粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF,100 ng·mL^-1)+干细胞因子(stem cell factor, SCF,50 ng·mL^-1)+FMS样酪氨酸激酶3(FMS like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L,100 ng·mL^-1)+血小板生成素(thrombopoietin, TPO,100 ng·mL^-1)+10%胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）+1%P/S条件培养组与IMDM培养基+GM-CSF(100 ng·mL^-1)+SCF(50 ng·mL^-1)+10%FBS+1%P/S条件培养组相比，收获的DC表型没有显著性差异，但前者能收获更多数量的DC;诱导分化阶段，肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）在和白介素-4（interleukin 4,IL-4）加入48 h后加入GM-CSF,比在其他时间加入收获DC的CD80和CD83的表达更高；流式细胞术结果显示未成熟DC具有较强的抗原吞噬活性；DC疫苗对异源脐血单个核细胞具有较强的刺激增殖能力；负载肿瘤细胞裂解物抗原的DC疫苗激活后的T细胞在体外对不同的乳腺癌细胞系具有显著的杀伤活性。结论:脐带血造血干细胞能够分化为数量可观的功能性DC,负载肿瘤细胞裂解物抗原的DC疫苗能激活T细胞并对乳腺癌细胞系具有显著的杀伤活性。

关键词

脐血 / CD34⁺造血干细胞 / 树突状细胞疫苗 / 乳腺癌