α1-抗胰蛋白酶的制备及其2种活性测定方法的对比分析

摘要

目的:从Cohn法组分Ⅳ沉淀中分离出α1-抗胰蛋白酶（alpha-1 antitrypsin, AAT）,并对2种测定AAT活性的方法进行对比分析。方法:组分Ⅳ沉淀溶解、压滤以及澄清过滤后的料液经SD病毒灭活后，进行3步层析、超滤浓缩、除菌过滤、分装冻干，最后经干热病毒灭活制成AAT制品。分别用胰蛋白酶法和弹性蛋白酶法测定AAT的活性，同时对2种方法的线性范围、专属性、准确性、重复性、中间精密度、线性、耐用性和一致性进行对比分析。结果:从组分Ⅳ沉淀中分离出AAT纯品；2种检测方法对于测定AAT活性的专属性和线性均较好，其中胰蛋白酶法检测范围为0～16μg·mL^-1,弹性蛋白酶法检测范围为0～2μg·mL^-1,重复性和中间精密度验证中RSD均<10%,高、中、低浓度的加标回收率均在80%～120%之间，孵育时间在20～40 min内2种方法的耐用性较好，且2种方法测定AAT活性的结果差异无统计学意义（P=0.173 0,>0.05）。结论:本研究成功从组分Ⅳ沉淀中分离出AAT纯品。胰蛋白酶法和弹性蛋白酶法测定AAT活性的检测结果均具有良好的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性，且2种方法具有良好的一致性，方法简便可靠，均可用于AAT制品的活性检测。

关键词

α1-抗胰蛋白酶 / 胰蛋白酶法 / 弹性蛋白酶法 / 活性