基于TCMIP和实验验证探讨藏药三味檀香散舒张肺小动脉的物质基础和作用机制

摘要

目的:探讨藏药三味檀香散（Tsantan Sumtang of Tibetan medicine,TS）舒张肺小动脉的物质基础和作用机制。方法:使用中医药整合药理学研究平台（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP）分析方剂中化学成分及疾病靶点，构建“方剂-疾病-靶点”的相互作用网络和“方剂-中药材-成分-疾病-靶点-通路”的多维网络图，利用分子对接进一步验证TS有效成分与关键靶点的互作关系。利用离体血管环实验评价TS有效成分对肺血管的舒张作用。通过构建低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）增殖模型，利用激光共聚焦检测细胞内Ca²⁺浓度，ELISA法用于分析TS有效成分对环化核苷酸（cyclic guanosine monophosphate,cGMP）和环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）含量的影响。结果:“方剂-疾病-靶点”的相互作用网络和“方剂-中药材-成分-疾病-靶点-通路”的多维网络图结果显示，TS包含的3味药材中有19个活性成分作用于136个靶点参与22条信号通路的调控，与治疗高原性肺动脉高压密切相关。分子对接结果显示TS有效成分与关键靶点具有较强的结合力，结合能前3位的成分为柚皮素、鞣花酸、西托糖苷，用这3个单体进行离体血管环实验，结果显示柚皮素、鞣花酸、西托糖苷对去甲肾上腺素（norephinephrine,NE）预收缩的大鼠肺小动脉血管环具有舒张作用，舒张率分别为（71.55±3.17）%,（68.91±17.72）%和（75.08±4.35）%。经一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐（N-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,LNAME）和环氧合酶（cyclooxygenase,COX）抑制剂吲哚美辛（indomethacin,INDO）预处理后，柚皮素、鞣花酸和西托糖苷对NE预收缩的血管舒张作用明显减弱;格列苯脲的预处理降低了柚皮素、鞣花酸和西托糖苷的舒血管效应，K_V通道抑制剂4-AP干预后，降低了柚皮素和西托糖苷对NE预收缩的血管舒张作用; K_IR通道抑制剂BaCl₂的预处理显著降低了鞣花酸、西托糖苷的舒血管效应;四乙基氯化铵的干预仅降低了西托糖苷的舒血管效应。细胞实验结果显示西托糖苷能够显著降低低氧诱导的PASMCs中Ca²⁺浓度，显著增加cGMP和cAMP的含量。结论:TS能够通过调控cGMP-PKG信号通路，激活PASMCs中的Kv通道抑制低氧诱导的PASMCs增殖舒张血管。

关键词

藏药三味檀香散 / 高原低氧性肺动脉高压 / 中医药整合药理学研究平台 / cGMP-PKG信号通路 / 肺动脉平滑肌细胞