全自动血凝仪测定瑞替普酶效价研究

摘要

目的:建立全自动血凝仪测定瑞替普酶（reteplase,rPA）效价的方法，并考察其作为质量控制方法的可行性。方法:采用全自动血凝仪凝固法，依次加入样品或标准品系列溶液、凝血酶（中间试剂）及人血浆纤维蛋白原和纤溶酶原的混合溶液（起始试剂）。反应温度为37℃，检测波长为405 nm，检测时间和延迟时间分别为900和10 s，算法为阈值法（曲线百分比）。测定rPA标准品溶液(600,800,1 000,1 200,1 400 ng·mL^-1)和样品系列溶液(800,1 000,1 200 ng·mL^-1)的凝块溶解时间。采用标准曲线法计算rPA样品的浓度和效价(U·mL^-1)。在实验室内进行专属性、准确度、线性与范围、精密度、耐用性等全面的方法学验证。分别采用血凝仪法和气泡上升法测定2批注射用rPA和1批rPA原液的效价。结果:r PA标准曲线线性回归方程为Y=-0.588 7X+4.508,R²=0.995 7。人血清白蛋白和本品的处方缓冲液均不显示纤维蛋白凝块溶解活性，方法的专属性较好。5个效价水平（60%,80%,100%,120%,140%）的中间精密度（CV，%）和重复性（CV，%）均<2%，相对偏倚均在0.29%～1.01%范围内，方法的准确度和精密度较好。采用本方法能有效检测注射用r PA制剂原液样品的效价，检测结果与传统气泡上升法无统计学差异，自动化血凝仪法的精密度更优。结论:本研究建立的全自动血凝仪效价检测方法操作简便、耗时短、准确度高、精密度好，较气泡上升法具有显著优势，可作为r PA的体外药效评价和质量控制方法。

关键词

瑞替普酶 / 全自动血凝仪 / 凝块溶解活性 / 效价 / 方法学验证