复方丹参滴丸改善高脂血症ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制

摘要

目的:网络药理学探讨复方丹参滴丸（Compound Danshen Dripping Pill,CDDP）改善动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的潜在靶点和作用机制，制备ApoE^-/-小鼠AS模型进行验证。方法:筛选CDDP的活性成分及作用靶点，预测AS相关靶点，聚焦共同靶标。构建“疾病-药物-成分-靶点”、PPI网络，进行基因本体论和京都基因与基因组百科全书分析。36只ApoE^-/-小鼠经高脂饲料喂养建立AS模型，另设c57BL/6小鼠12只为空白组、ApoE^-/-小鼠加普通饲料12只为对照组，12周后通过小鼠体重、血浆总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）指标验证AS模型复制成功。随后将小鼠随机分为阿托伐他汀钙片阳性组(2.6 mg·kg^-1·d^-1),CDDP高、中、低剂量组(210,105,52.5 mg·kg^-1·d^-1)，继续边造模边给药12周。观察给药前后小鼠体重;血浆TC,TG,LDL-C和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）的影响;血清炎症白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-4、IL-13表达情况;肝脏TG、游离脂肪酸（nonestesterified fatty acid,NEFA）、游离胆固醇（free cholesterol,FC）的含量;苏木精-伊红染色观察主动脉和肝脏病理形态;蛋白质印迹检测巨噬细胞相关炎症通路氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ）、核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）、p-NF-κB蛋白表达。结果:共得到CDDP活性成分76个、作用靶点197个，AS/高脂血症（hyperlipidemia,HLP）相关靶点2 552个，获得药物与疾病的共同靶点123个; CDDP治疗AS/HLP的关键活性成分为丹参酮ⅡA、木犀草素、槲皮素等;主要通过PPAR,NF-κB,MAPK,TNF等信号通路发挥作用。动物实验表明CDDP能显著增加ApoE^-/-高脂组体重（P<0.01）;降低AS小鼠血浆中TC,TG和LDL-C的水平，升高HDL-C水平（P<0.05）;显著降低小鼠血清IL-6,TNF-α含量，升高IL-4,IL-13的表达水平（P<0.01）;降低肝脏中TG,NEFA,FC的含量（P<0.01,P<0.05）;改善主动脉血管内皮损伤和斑块沉积形态，减轻肝组织病理中脂肪病变;明显上调PPARγ、下调NF-κB,p-NF-κB蛋白表达（P<0.01,P<0.05）。结论:CDDP可通过调节巨噬细胞相关炎症反应来发挥抗动脉粥样硬化的作用，这一机制可能与调节巨噬细胞相关通路PPARγ/NF-κB有关。

关键词

巨噬细胞 / 动脉粥样硬化 / ApoE^-/-小鼠 / 氧化物酶体增殖物激活受体/核因子-κB通路