大鼠破伤风疫苗特异性ELISpot检测方法的建立及应用

摘要

目的:建立大鼠破伤风疫苗抗原特异性ELISpot检测方法。方法:基于SD大鼠动物模型，采用单次疫苗免疫后每2周动态监测策略[d 1给药前、d 14、d 28采集血样并分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）]，系统优化多肽刺激物浓度、阳性对照物配比等关键参数，建立干扰素-γ酶联免疫斑点检测方法（IFN-γ ELISpot），并检测该疫苗的T细胞免疫应答水平。结果:研究确定实验孔多肽刺激物的最佳浓度为5μg·m L^-1·肽链^-1，最佳阳性对照刺激物浓度为20 ng·m L^-1PMA+0.4μg·m L^-1Ionomycin，鉴定出9个能有效刺激T细胞反应的优势多肽序列。结论:本研究建立的方法在检测破伤风疫苗免疫后的细胞免疫水平方面表现出良好的性能。

关键词

破伤风疫苗 / ELISpot / T细胞免疫应答 / 干扰素-γ / 多肽筛选 / 疫苗效力评价