蛋白激酶C抑制剂对苏尼替尼所致心脏毒性的保护作用

摘要

目的 在细胞和整体动物水平探讨蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）抑制剂对苏尼替尼（Sunitinib, SU）引发心脏毒性的保护作用。方法 新生大鼠心肌细胞（neonatal rat ventricular myocytes, NRVMs）在不同浓度的SU（1,5,10μmol/L）中进行孵育，检测细胞三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）含量、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）释放量及线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP）。然后观察非选择性PKC抑制剂（bisindolylmaleimide 1,Bis-1）、选择性新型PKC抑制剂（Rotterlin）或抑制肽对SU引发心肌细胞毒性的影响。雄性C57小鼠随机分为4组，即正常对照组、SU组、SU+PKC抑制剂白屈菜红碱（chelerythrine, CHE）低剂量(0.375 mg·kg^-1·d^-1)及CHE高剂量(0.75 mg·kg^-1·d^-1)组。连续灌胃SU同时腹腔注射CHE,给药3周后取心脏组织，提取线粒体，检测心肌细胞线粒体呼吸链复合物Ⅳ和Ⅴ活性；电镜观察心肌细胞线粒体结构变化；Western blot检测各组心肌磷酸化PKC亚型包括PKCα、PKCε以及PKCδ的表达情况。结果 SU孵育NRVMs后呈浓度与时间依赖性减少ATP含量、增加LDH释放量、降低线粒体膜电位。非选择性PKC抑制剂Bis-1可预防SU引发的上述改变；选择性新型PKC抑制剂Rotterlin和新型PKCε抑制肽亦可预防SU引起的上述各项指标的变化。小鼠给予SU后，心肌细胞线粒体呼吸链复合物Ⅳ和Ⅴ的活性均显著下降，电镜显示，心肌细胞线粒体出现明显肿胀、嵴融合等形态改变；同时给予不同剂量的CHE后，线粒体呼吸链复合物Ⅳ和Ⅴ的活性均显著升高，电镜结果显示，CHE明显减轻SU所致线粒体形态改变。Western检测显示，SU组心肌磷酸化PKCε表达量显著升高，而磷酸化PKCδ、PKCα表达量则无明显变化；高剂量的CHE显著抑制了磷酸化PKCε的过表达，使其恢复至对照组水平。结论 PKC抑制剂对SU导致的心脏毒性具有显著保护作用，此作用可能源于抑制新型PKC（主要是PKCε亚型）的过度激活。

关键词

蛋白激酶C抑制剂 / 苏尼替尼 / 心脏毒性