LINC00319通过靶向mi R199a-5-p促进瘢痕疙瘩发生发展

摘要

目的 探讨长链非编码RNA LINC00319在瘢痕疙瘩发生发展中的作用及其潜在分子机制。方法 纳入2024年2月—2025年2月承德医学院附属医院收治的经临床明确诊断的瘢痕疙瘩患者18例，分别采集瘢痕疙瘩组织及相邻正常皮肤组织，分离原代成纤维细胞，获得瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts, KFs)与正常皮肤成纤维细胞(normal dermal fibroblasts, NFs)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测组织和细胞中LINC00319与miR-199a-5p的相对表达水平。通过小干扰RNA技术沉默KFs中LINC00319的表达，并通过qRT-PCR验证沉默效率。应用CCK-8实验评估LINC00319沉默对KFs增殖能力的影响，流式细胞术测定细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因检测明确LINC00319与miR-199a-5p之间的靶向结合关系，进一步通过qRT-PCR检测LINC00319敲降对miR-199a-5p表达的调控作用。将si-LINC00319与miR-199a-5p inhibitor联合转染KFs,以评估其对细胞增殖能力的影响。结果 与正常皮肤组织(0.76±0.31)及NFs(0.84±0.14)比较，LINC00319在瘢痕疙瘩组织(6.29±4.07)及KFs(4.90±0.37)中表达水平显著升高(P<0.001)。LINC00319表达水平与温哥华瘢痕评定量表评分呈正相关(r=0.794,P<0.001)。敲降LINC00319后，KFs在24 h、48 h、72 h的光密度值(0.34±0.01、0.50±0.01、0.59±0.01)显著低于对照组(0.49±0.01、0.68±0.01、0.80±0.01),组间、时点间、组间·时点间交互作用差异有统计学意义(P<0.05)。si-LINC00319组的凋亡率(30.58±2.48)%显著高于对照组(9.69±1.22)%(P<0.001)。双荧光素酶报告实验结果表明，LINC00319可与miR-199a-5p直接结合。在KFs中，miR-199a-5p的表达水平(0.68±0.02)显著低于对照组(1.09±0.07)(P<0.001),而沉默LINC00319后，其表达水平(1.81±0.05)显著高于对照组(0.94±0.06,P<0.001)。功能回复实验显示，si-LINC00319处理显著抑制KFs的增殖能力，然而在同时转染miR-199a-5pinhibitor的条件下，KFs于24 h、48 h、72 h的光密度值(0.43±0.01、0.68±0.02、0.79±0.02)较si-LINC00319组(0.34±0.01、0.49±0.01、0.59±0.01)显著升高，组间、时点间、组间·时点间交互作用差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LINC00319通过负向调控miR-199a-5p的表达，促进瘢痕疙瘩的发生与发展。

关键词

瘢痕疙瘩 / LINC00319 / miR-199a-5p