单分子免疫阵列技术测定子痫前期患者PLGF的变化及其通过ERK途径对滋养细胞功能的调控

摘要

目的 探究胎盘生长因子(placental growth factor, PLGF)通过细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK)转导途径对子痫前期患者滋养细胞功能的调控及其作用机制。方法 收集2022年9月—2024年2月河北生殖妇产医院产科收治的子痫前期患者155例为疾病组，并选择同期健康孕妇60例为对照组，均行剖宫产手术，获得胎盘组织和血液样本，酶联免疫吸附法和免疫组织化学法测定PLGF表达水平。将人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo分成正常对照组(未经任何处理的HTR-8/SVneo细胞)、阳性对照组(过氧化氢处理)、PLGF病毒组(用含有PLGF基因的逆转录病毒感染HTR-8/SVneo细胞，使其过表达PLGF)和PLGF-shRNA病毒组(用含有针对PLGF基因的shRNA的逆转录病毒感染HTR-8/SVneo细胞，使其PLGF基因沉默)。CCK-8法测定各组细胞增殖情况，比色法测定各组细胞超氧化物歧化酶和丙二醛含量，Transwell法测定各组细胞迁移数量，流式细胞仪测定各组细胞凋亡情况，PCR法测定各组细胞PLGF和ERK mRNA表达情况，Western blot法测定各组细胞PLGF和ERK信号通路蛋白表达情况。结果 疾病组血清PLGF水平明显低于对照组[(1.21±0.40) ng/L vs.(1.67±0.33) ng/L,t=7.922,P<0.001],PLGF在胎盘滋养层细胞里主要以细胞质形态出现，呈现为浅黄或棕色到棕褐色的小粒状染色。正常对照组、阳性对照组、PLGF病毒组和PLGF-shRNA病毒组细胞增殖情况均呈显著增加的趋势，正常对照组细胞增殖均明显高于PLGF病毒组、阳性对照组和PLGF-shRNA病毒组，组间、时点间、组间·时点间交互作用差异有统计学意义(P<0.001)。正常对照组、阳性对照组、PLGF病毒组和PLGF-shRNA病毒组滋养细胞MDA[(3.71±0.73)nmol/mg prot vs.(12.89±3.65)nmol/mg prot vs.(5.09±0.40)nmol/mg prot vs.(15.20±3.00)nmol/mg prot,F=33.594,P<0.001]、SOD[(13.89±4.53)U/mg prot vs.(2.76±0.72)U/mg prot vs.(8.55±1.20)U/mg prot vs.(1.29±0.63)U/mg prot,F=34.931,P<0.001]、滋养细胞迁移细胞数量[(148.15±32.77)个vs.(53.49±13.65)个vs.(98.22±8.44)个vs.(35.28±5.92)个，F=44.621,P<0.001]、凋亡率[(4.95±0.67)%vs.(18.55±4.73)%vs.(10.23±4.44)%vs.(25.11±4.33)%,F=31.089,P<0.001]、PLGF mRNA(1.29±0.34 vs. 0.55±0.13 vs. 1.11±0.19 vs. 0.31±0.09,F=28.887,P<0.001)、ERK mRNA(1.87±0.42 vs. 0.61±0.10 vs. 1.29±0.47 vs. 0.41±0.13,F=22.887,P<0.001)、PLGF蛋白(1.48±0.10 vs. 0.55±0.11 vs. 1.12±0.31 vs. 0.33±0.10,F=51.707,P<0.001)、ERK蛋白表达(1.69±0.17 vs. 0.47±0.19 vs. 1.21±0.32 vs. 0.29±0.09,F=58.179,P<0.001)差异有统计学意义。结论 子痫前期的发生、发展与PLGF的低表达相关，其高表达可改善HTR-8/SVneo细胞氧化应激反应，促进细胞迁移能力，减小细胞凋亡率，并增强其细胞增殖水平，与ERK信号通路表达有关。

关键词

子痫 / 胎盘生长因子 / 细胞外信号调控激酶