HPLC-MS/MS检测血清Hcy谱的方法建立及在CKD中的临床应用

摘要

目的 建立高效液相色谱串联质谱（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）定量检测血清同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）谱的检测方法及在慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）中的临床应用。方法 选取2024年1月—2025年1月初次就诊于河北医科大学第二医院的临床诊断为CKD的患者308例（CKD组）和健康体检人群103例（CON组）为研究对象，检测2组人群血清Hcy、半胱氨酸（cysteine,Cys）及甲硫氨酸（methionine,Met）水平。检测采用HPLC-MS/MS系统，使用色谱柱[（2.1×100.0） mm,2.1μm]分离，柱温40℃，流动相为0.2%甲酸水溶液和纯乙腈，梯度洗脱，并应用线性、定量下限、精密度、正确度、基质效应、样本稳定性、残留、干扰及稀释一致性等参数进行方法的性能验证。结果 共411例CON人群及CKD患者入选该研究，CON组103例，年龄（50.01±12.41）岁，男性58例，女性45例，CKD组308例，年龄（54.44±15.38）岁，男性172例，女性136例；Hcy、Cys、Met的线性范围分别是1～100、5～500、2～200μmol/L；定量下限分别是1、5、2μmol/L；批内、批间变异系数（coefficient of variation,CV）均<±15%；回收率分别是97%～105%、93%～111%、102%～109%;1∶1混合样本的Hcy、Cys、Met测定值比血清基质样本及纯溶液样本测定值的均值低1.45%、3.52%、2.18%；血清Hcy、Cys、Met的浓度含量在7 d内以及样本处理后24 h内与首次测定结果的相对偏差均<±15%；该方法残留较少，且不受溶血、黄疸和脂血的干扰；稀释5倍、10倍和20倍血清样品中的Hcy、Cys及Met测定值CV均小于15%，且回收率均在85%～115%以内；与CON组相比，CKD组血清Hcy及Cys水平显著升高（P<0.001）。结论 本研究建立的血清Hcy谱HPLC-MS/MS检测方法性能良好，可用于检测CKD患者血清Hcy谱的含量。

关键词

肾疾病 / 高效液相色谱串联质谱法 / 同型半胱氨酸