枸杞多糖促进HL-60细胞的吞噬功能

摘要

目的 探究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide, LBP)对人中性粒细胞株HL-60细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 采用不同浓度(0,1,10,100,200,500μg/mL)LBP刺激HL-60细胞24 h后，通过CCK-8和流式细胞术检测HL-60细胞的存活率和吞噬功能变化情况，通过免疫印迹法(Western blot)检测HL-60细胞磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路Akt磷酸化情况。阻断实验分为对照组、LBP组、LBP+PI3K抑制剂(Wortmannin)组。LBP组以200μg/mL LBP单独刺激HL-60细胞24 h; LBP+Wortmannin组先以1μmol/L Wortmannin预刺激HL-60细胞2 h,再加入200μg/mL LBP继续作用24 h后检测HL-60细胞吞噬功能情况。为了检测HL-60细胞表面受体的表达情况，实验分为对照组和LBP组(200μg/mL),采用流式细胞术检测CD36、CD204、CD209、胶原样结构巨噬细胞受体(macrophage receptor with collagenous structure, MARCO)和Dectin吞噬相关受体表达情况。结果 不同剂量LBP处理后，HL-60细胞的存活率未发生明显变化(P>0.05);与0μg/mL LBP比较，1～200μg/mL LBP刺激HL-60细胞吞噬百分率明显增加(P<0.01);与对照组比较，200μg/mL LBP组磷酸化Akt表达增加(P<0.05)。PI3K阻断实验表明，与LBP组比较，LBP+Wortmannin组LBP促进HL-60吞噬E.coli的效应部分抑制(P<0.05)。与对照组比较，LBP组HL-60细胞MARCO受体表达水平明显增加(P<0.05),而CD36、CD204、CD209和Dectin无明显变化(P>0.05)。结论 LBP通过PI3K-Akt信号通路促进HL-60细胞吞噬E.coli,这种吞噬功能的提高可能与MARCO受体表达上调有关。

关键词

枸杞多糖 / HL-60细胞 / 吞噬作用 / PI3K-Akt信号通路 / MARCO受体